臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試輔導:糖化血紅蛋白測定方法
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糖化血紅蛋白測定(glycosylated hemoglobin A,GHb)
成人紅細胞中的血紅蛋白有HbA(占95%~97%以上),HbA2(占2.5%),HbF(占0.2%)。當HbA中的部分血紅蛋白被糖基化后,其中由于HbA的β鏈N末端的纈氨酸分子與葡萄糖等己糖分子相結合而使其在血紅蛋白電泳中成為HbA之前的快泳、HbA1組分,在離子交換柱層析中亦在HbA之前首先被洗脫,糖化Hb可分為HbA1a(其中與1,6-二磷酸果糖結合的為HbA1a1;與6-磷酸葡萄糖結合的為HbA1a2),HbA1b(尚無明確定義,包括HbA1b1,HbA1b2,HbA1b3),HbA1e(與葡萄糖結合)和HbA1d(α鏈和β鏈內(nèi)氨基以及α鏈的N末端基團上的烯化血紅蛋白;包括HbA1d1,HbA1d2,HbA1d3)共九種。最重要的是HbA1c.HbA1e的生成量取決于血糖的濃度,正常人約占4%~6%。由于紅細胞的半壽期是60天,所以GHb的測定可以反映測定前8周左右病人的平均血糖水平。
GHb測定方法很多,兩種最基本的方法是:測定HbA1組分和僅測定HbA1c.高壓液相色譜(HPLC)法可精確分離HbA1各組分;并分別得出HbA1a、HbA1b、HbA1c、HbA1d的百分比,CV3%,是參考方法,其次還有低壓液相色譜(LPLC),目前二者均有高精度的自動化儀器,作為常規(guī)方法用于臨床;硼酸親和柱層析法CV(1%~4.7%),陽離子交換柱層析法CV(2%~16%),測定的血紅蛋白類型為HbA1.前者在樣本量不大的實驗室仍可使用;后者在分離過程中對pH和溫度的要求極高,HbF是其干擾因素。電泳法CV(4%~10%),分離Hb類型和干擾因素與陽離子交換柱層析法相同;比色法可用于自動生化儀,無血紅蛋白分離步驟,干擾因素小,具特異性和敏感性,但CV較大(4%~18%),且樣品用量大,用濃度單位報告的方式還未被廣大臨床醫(yī)師接受。
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