2017年中西醫(yī)結(jié)合執(zhí)業(yè)助理醫(yī)師考試藥理學(xué)復(fù)習(xí)講義第三章

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　　第三章 有機(jī)磷酸酯類中毒及解救

　　Toxication and Detoxication of Organophosphates

　　【目的和原理】 觀察有機(jī)磷酸酯類( organophosphates)中毒的癥狀，理解解救藥阿托品、解磷定的解救作用及機(jī)制。掌握家兔耳緣靜脈注射的方法。

　　Organophosphates通過抑制膽堿酯酶( cholinesterase，AChE)活性，使乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)在體內(nèi)堆積，產(chǎn)生中毒癥狀?？鼓憠A藥阿托品能解除有機(jī)磷酸酯類中毒的 M樣癥狀，而解磷定可復(fù)活 AChE，恢復(fù)其水解ACh的能力，對M及N 樣癥狀均有效，以緩解骨骼肌震顫的效果最快，兩藥合用可提高解救效果。

　　【實(shí)驗(yàn)動(dòng)物】家兔，體重2.5～3.0kg。

　　【實(shí)驗(yàn)器材和藥品】兔固定箱、測瞳尺、聽診器、注射器(5ml、10ml、20ml)、針頭、兔耳夾、脫脂棉球、臺(tái)秤、722分光光度計(jì)、恒溫水浴箱、試管及試管架、加樣器、 effendorff管、濾紙。

　　10%美曲膦酯[敵百蟲( depterex)]、0.05%硫酸阿托品( atropine sulfate)、2.5%解磷定(pyridine aldoxime methiodide,PAM)、生理鹽水( saline)。

　　【實(shí)驗(yàn)步驟和觀察項(xiàng)目】

　　1.健康家兔5只 ，稱體重，分為5組，分別為空白對照組(甲)、模型組(乙)、給

　　解救藥組：atropine組(丙)、PAM組(丁)、atropine + PAM組(戊)，觀察并記錄各組家兔的活動(dòng)情況：呼吸(頻率、幅度、肺呼吸音、有無呼吸困難，呼吸道有無分泌物等)，瞳孔大小( pupillary size)，唾液分泌( salivary secretion)，大小便( urination and defecation)，肌張力(muscular tension)及有無肌肉震顫(muscle tremor)等。

　　2.將甲、乙、丙、丁、戊、五只家兔分別放于兔固定箱內(nèi)，甲兔由耳緣靜脈給予 saline(1ml/kg);乙、丙、丁、戊兔分別由耳緣靜脈緩慢注入depterex(1ml/kg)，給藥后密切觀察上述指標(biāo)的變化并記錄。待 M樣、N樣中毒癥狀均較明顯時(shí)，乙兔不予解救藥，使其中毒癥狀充分表現(xiàn)出來，如果死亡，分析死亡原因;丙兔耳緣靜脈注射 atropine(2ml/kg)，丁兔耳緣靜脈緩慢注射 PAM(4ml/kg)，戊兔耳緣靜脈先 atropine(2ml/kg)，而后注射 PAM(4ml/kg)，觀察中毒癥狀有何變化， atropine和PAM分別改善了哪些癥狀?

　　3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄:

　　一般 呼吸 心率 瞳孔 唾液 大小便 肌張力 肌震顫

　　狀態(tài) 次/min 次/min 大小 分泌

　　給藥前

　　給敵百蟲

　　給阿托品

　　給解磷定

　　阿 + 解

　　附：膽堿酯酶活性測定( determination of activity of AChE)

　　【目的和原理】學(xué)習(xí) AChE活性的測定方法 ,觀察中毒前后及使用不同解救藥后 AChE活性的變化。

　　ACh在血液中被 AChE水解，產(chǎn)生醋酸和膽堿。在一定范圍，水解的 ACh量與 AChE的活性成正比。故在反應(yīng)體系中，加入定量的 ACh使之參加反應(yīng)，通過測定剩余的 ACh即可計(jì)算出水解 ACh的量，從而推算出 AChE活性。

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　　ACh的呈色反應(yīng)

　　ACh可與羥胺反應(yīng)生成乙酰羥肟酸，后者在酸性條件下與三價(jià)鐵離子形成褐色的羥肟酸鐵絡(luò)合物，其顏色的深淺可反映 ACh含量。反應(yīng)過程如下：

　　(1)鹽酸羥胺與氫氧化鈉作用釋放出游離羥胺

　　NH2OH·HCL+NaOH→NH2OH+NaCL+H2O

　　(2) 剩余 ACh與游離羥胺作用，生成羥肟酸化合物

　　(CH3)≡N—(CH2)2OCOCH3+NH2OH→CH3CONHOH +(CH3)3≡N—(CH2)2OH

　　(3)羥肟酸化合物在酸性環(huán)境中與三氯化鐵生成褐色復(fù)合物(羥肟酸鐵絡(luò)合物)

　　酸性 Fe/3

　　FeCL3+CH3CONHOH

　　CH3CONHO+HCL

　　(棕紅色)

　　【實(shí)驗(yàn)藥品】

　　(1) 7×10-3mol/L氯化 ACh：取 ACh用蒸餾水配成 2.54%溶液，冰箱保存。用前以蒸餾水 20倍稀釋即成 7×10-3mol/L ACh溶液。

　　(2) 1mol/L鹽酸羥胺( NH2OH·HCL)：取 25g鹽酸羥胺，加蒸餾水 359ml，冰箱保存。

　　(3) 3.5N NaOH。

　　(4) 4N HCL。

　　(5) 3.7×10-1mol/L三氯化鐵(FeCL3·6 H2O )：取 10g三氯化鐵，加蒸餾水至 20ml，濃 HCl 0.84ml，加溫溶解，最后加蒸餾水至 100ml制成 3.7×10-1mol/L三氯化鐵(FeCL3 0.1N HCl)溶液。

　　(6) PH7.2的磷酸緩沖液：取Na2HPO4·12H2O16.72g和KH2PO42.72g加蒸餾水至100ml，冰箱保存。

　　【實(shí)驗(yàn)步驟】

　　(1)家兔在給藥前、中毒癥狀明顯后、給atropine待癥狀明顯緩解后、給予 PAM解救后0min、10min、20min、30min等時(shí)間點(diǎn)分別由兔耳緣靜脈或股靜脈取血0.5ml，測定 AChE活性。

　　(2)取 20ml試管若干個(gè)，按表加入磷酸緩沖液 0.85~1ml，血樣 0~0.15ml，置 37℃±1℃恒溫水浴中預(yù)熱 3~5min。

　　(3)加入 7×10-3mol/L ACh溶液 1.0ml(用加樣器)，于 37℃±1℃水浴中反應(yīng) 40min，每隔 10min搖動(dòng)一次。

　　(4)反應(yīng) 40min后立即加入堿性羥胺( 1mol/L NH2OH·HCL與 3.5N NaOH溶液在用前20min等容混合，并不斷震蕩)4.0ml。

　　(5)依次加入 4N HCL和 3.7×10-1mol/L FeCL3各 2ml，每加入一種試劑都要充分振蕩。

　　(6)上述反應(yīng)液均用濾紙過濾，將濾液倒入比色杯中，以 530nm的波長比色。

　　(7)對照管(標(biāo)準(zhǔn) ACh值)：為反應(yīng)體系中全量 ACh對照。

　　空白管：為無血、無 Ach的其它試劑對照。

　　對照管與空白管操作步驟同其它樣品。

　　【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】

　　1.計(jì)算酶活性：全血 AChE活性值以 0.15ml全血在 40min內(nèi)水解 ACh的μmol數(shù)表示

　　(μmol/0.15ml/40min)

　　①酶活性計(jì)算：

　　OD標(biāo)準(zhǔn)管—OD測定管

　　全血 AChE活性值 = ×7

　　OD標(biāo)準(zhǔn)管

　?、诿富钚灾蛋俜?jǐn)?shù)計(jì)算

　　樣本 AChE活性值

　　×100%

　　正常全血 AChE活性值

　　1.繪制時(shí)效曲線

　　根據(jù)給予 PAM解救后幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)的 AChE活性值制圖。

　　酶活性(%)

　　時(shí)間

　　【注意事項(xiàng)】

　　1.Depterex屬于劇毒殺蟲劑，且可從皮膚吸收，如與手等接觸后，應(yīng)立即用清水清洗。

　　2.給家兔 depterex后，15min仍未出現(xiàn)中毒癥狀，可再追加 1/3劑量的depterex溶液。

　　3.測定 AChE活性時(shí)，加入每種試劑時(shí)劑量一定要準(zhǔn)確。

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