2014年臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師免疫學(xué)考試輔導(dǎo)：抗原或抗體的檢測

　　2014年臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師免疫學(xué)考試輔導(dǎo)之抗原或抗體的檢測，環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)搜集整理相關(guān)考試輔導(dǎo)資料供考生們參考，希望對大家有所幫助。

　　一、檢測的原理

　　借助抗原和抗體在體外特異結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象，對樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性、定量、定位的檢測。

　　1.抗原與抗體的親和力(affinity)抗原抗體的結(jié)合就像酶與底物的結(jié)合，激素與其受體的結(jié)合一樣不是化學(xué)的反應(yīng)，而是非共價鍵的可逆的結(jié)合。抗原決定簇和抗體分子可變區(qū)互補構(gòu)型，造成兩分子間有較強的親和力?？臻g構(gòu)型互補程度不同，抗原和抗體分子之間結(jié)合力強弱也不同?；パa程度高，則親和力強。此外，反應(yīng)溫度、酸堿度和離子濃度對抗原和抗體分子上各基因的解離性和電荷特性也有重要的影響，抗體與抗原決定簇之間的結(jié)合力大小可用親合力來表示。高親合力的抗體與抗原的結(jié)合力強，即使抗原濃度很低時也有較多的抗體結(jié)合抗原形成免疫復(fù)合物。

　　2.抗原或抗體外檢測原理根據(jù)抗原抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物的性狀與活性特點，對標(biāo)本中的抗原或抗體進(jìn)行定性、定位或定量的檢測。定性和定位檢測比較簡單，即用已知的抗體和待檢樣品混合，經(jīng)過一段時間，若有免疫復(fù)合物形成的現(xiàn)象發(fā)生，就說明待檢樣品中有相應(yīng)的抗原存在。若無預(yù)期的現(xiàn)象發(fā)生，則說明樣品中無相應(yīng)的抗原存在。同理也可用已知的抗原檢測樣品中是否有相應(yīng)抗體。

　　對抗原或抗體進(jìn)行定量檢測時，以反應(yīng)中加入抗原和抗體的濃度與形成免疫復(fù)物的濃度呈函數(shù)關(guān)系。

　　(1)根據(jù)免疫復(fù)合物產(chǎn)生的多少來推算樣品中抗原(或抗體)的含量：在一定的反應(yīng)條件下，加入的已知抗體(或抗原)的濃度一定，反應(yīng)產(chǎn)生的免疫復(fù)合物多少與待檢樣品中含有相應(yīng)抗原(或抗體)量成正比。也就是抗體濃度一定時，免疫復(fù)合物越多則樣品中的抗原量也越多?？捎脤嶒炐詷?biāo)準(zhǔn)曲線推算出樣品中抗原(或抗體)的含量。如免疫單向擴(kuò)散試驗、免疫比濁試驗和酶聯(lián)免疫檢測等都屬于這類方法。

　　(2)抗原或抗體效價滴定的原理：當(dāng)抗原抗體復(fù)合物形成多少不能反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)強弱時，就不能以檢測反應(yīng)強度來對抗原或抗體進(jìn)行定量。在實際工作中，把濃度低的反應(yīng)成分(抗原或抗體)的濃度固定，把濃度高的另一種反應(yīng)成分作一系列稀釋。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比較3只家兔產(chǎn)生抗體的多少，即滴定3只兔血清抗體效價，可用雙向瓊脂擴(kuò)散法來滴定，例如將抗體濃度固定，將抗原作不同的稀釋度，分別將抗原或抗體滴入瓊脂的相應(yīng)小孔中，觀察免疫兔血清與不同稀釋度的抗原出現(xiàn)明顯沉淀淺的抗原稀釋度(如甲兔的抗體效價為1/2000，而丙免的是1/8000則可比較出后者比前者產(chǎn)生抗體的效價要高)。也就是表示效價的稀釋度越高，樣品中所含待檢成分越多。因人血清(抗原)和抗體(免疫兔血清)相比，濃度高，故應(yīng)稀釋抗原。

　　二、抗原或抗體檢測的實用意義

　　1.抗體檢測的意義檢測抗體可用于評價人和動物免疫功能的指標(biāo)?？贵w用于臨床治療或?qū)嶒炑芯繒r也需做純度分析和定量測定。臨床上檢測病人的抗病原生物的抗體、抗過敏原的抗體、抗HLA抗原的抗體、血型抗體及各種自身抗體，對有關(guān)疾病的診斷有重要意義。

　　2.抗原檢測的意義可做為抗原進(jìn)行檢測的物質(zhì)可分為以下四類：

　　(1)各種微生物及其大分子產(chǎn)物：用于傳染病診斷、微生物的分類及鑒定以及對菌苗、疫苗的研究。

　　(2)生物體內(nèi)各種大分子物質(zhì)：包括各種血清蛋白(如各類免疫球蛋白、補體的各種成分)、可溶性血型物質(zhì)、多肽類激素、細(xì)胞因子及癌胚抗原等均可做為抗原進(jìn)行檢測。在對這些成分的生物學(xué)作用的研究以及各種疾病的診斷有重要意義。

　　(3)人和動物細(xì)胞的表面分子：包括細(xì)胞表面各種分化抗原(如CD抗原)、同種異型抗原(血型抗原或MHC抗原)、病毒相關(guān)抗原和腫瘤相關(guān)性情抗原等。檢測這些抗原對各種細(xì)胞的分類、分化過程及功能研究、對各種與免疫有關(guān)的疾病的診斷及發(fā)病機(jī)制的研究，均有重要意義。

　　(4)各種半抗原物質(zhì)：某些藥物、激素和炎癥介質(zhì)等屬于小分子的半抗原，可以分別將它們偶聯(lián)到大分子的載體上，組成人工結(jié)合的完全抗原。用其免疫動物，制備出各種半抗原的抗體，應(yīng)用于各種半抗原物質(zhì)的檢測，例如對某些病人在服用藥物后進(jìn)行血中藥物濃度的監(jiān)測。對運動員進(jìn)行服用違禁藥品的檢測，都是應(yīng)用半抗原檢測的方法。

　　三、抗原或抗體檢測的方法

　　由于各種檢測方法中所用的抗原性狀不同，出現(xiàn)結(jié)果的現(xiàn)象也不同。最廣泛應(yīng)用方法有下述幾種：

　　(一)沉淀反應(yīng)

　　可溶性抗原與抗體結(jié)合，在兩者比例合適時，可形成較大的不溶性免疫復(fù)合物。在反應(yīng)體系中出現(xiàn)不透明的沉淀物，這種抗原抗體反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)(precipitation neaction)。

　　1.環(huán)狀沉淀試驗　　先將含抗體的未稀釋的免疫血清加到直徑小于0.5cm的小試管底部。將稀釋的含有可溶性抗原的材料重疊于上，讓抗原與抗體在兩液體的界面相遇，形成白色免疫復(fù)合物沉淀環(huán)，故名為環(huán)狀沉淀試驗(ring precipitationtest),此法簡便易行，需用材料較多是其缺點。

　　2.單向免疫擴(kuò)散試驗　　單向免疫擴(kuò)散試驗 (single immunodiffusion)是在凝膠中進(jìn)行的沉淀反應(yīng)。將抗體混入加熱溶解的瓊脂中，傾注于玻片上，制成含有抗體的瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔，將抗原材料加入瓊脂板的小孔內(nèi)，讓抗原從小孔向四周的瓊脂中擴(kuò)散，與瓊脂中的抗體相遇形成免疫復(fù)合物。當(dāng)復(fù)合物體積增加到一定程度時停止擴(kuò)散，出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關(guān)。本方法簡便，易于觀察結(jié)果，可測定抗原的靈敏度(最低濃度)約為10～20μg/ml，常用于定量測定人或動物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺點是需1～2天才能看結(jié)果(圖20-1)

　　圖20-1 單向免疫擴(kuò)散試驗示意圖

　　3.免疫比濁法　 當(dāng)抗體濃度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不見的小免疫復(fù)合物，它可使通過液體的光束發(fā)生散射，隨著加入抗原增多，形成的免疫復(fù)合物也增多，光散射現(xiàn)象也相應(yīng)加強。免疫比濁法(immunonephelomytry)就是在一定的抗體濃度下，加入一定體積的樣品，經(jīng)過一段時間，用光散射濁度計 (nephelometry)測量反應(yīng)液體的濁度，來推算樣品中的抗原含量。本法敏感、快速簡便，可取代單向擴(kuò)散法定量測定免疫球蛋白的濃度。

　　4，雙向免疫擴(kuò)散試驗　 雙免疫擴(kuò)散試驗(double immunodiffusion)是在瓊脂板上按一定距離打數(shù)個小孔，在相鄰的兩孔內(nèi)分別放入抗原和抗體材料。當(dāng)抗原和抗體向四周凝膠中擴(kuò)散，在兩孔間可出現(xiàn)2～3條沉淀線，本法常用于抗原或抗體的定性或定量檢測，或用于兩種抗原材料的抗原相關(guān)性分析

　　5.對流免疫電泳　對流電泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的檢測方法，即在電場作用下的雙向免疫擴(kuò)散。將瓊脂板放入電泳槽內(nèi)，使瓊脂板的兩孔沿著電場的方向，于負(fù)極側(cè)的孔內(nèi)加入抗原，于正極側(cè)的孔內(nèi)加入抗體，通電后，抗原帶負(fù)電荷向正極泳動，抗體分子雖也帶負(fù)電荷，但因分子量大，向正極的位移小，而受瓊脂中電滲作用向負(fù)極移動，抗原和抗體能較快地集中在兩孔之間的瓊脂中形成免疫復(fù)合物的沉淀線。只需1小時左右即可觀察結(jié)果。

　　6.免疫電泳　 免疫電泳(immunoelectrophoresis)的方法分成兩個步驟，即先進(jìn)行電泳，再進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散。先將樣品加入瓊脂中電泳，將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。然后在適當(dāng)?shù)奈恢蒙涎仉娪痉较蛲谝恢本€形槽，于槽內(nèi)加入含有針對各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應(yīng)抗體進(jìn)行雙向免疫擴(kuò)散，可形成多答卷沉淀線。常用此法進(jìn)行血清的蛋白種類分析。對于免疫球蛋白缺損或增多的疾病的診斷或鑒別診斷有重要意義

　　7.免疫印跡法免疫印跡法(immunoblotting)又稱為Western印跡法，用于AIDS的血清抗體檢測。第一步，為電泳分離HIV抗原，在電場中根據(jù)分子量大小不同病毒抗原各成分散開。第二步，將電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上(電印跡)，然后將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕于病人血清中。如果病人血清中含有與一種或幾種抗原相對應(yīng)的抗體的話，則在該抗原印跡部位形成免疫復(fù)合物沉淀。在洗去未沉淀的抗原和抗體后，在膜上加標(biāo)記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復(fù)合物發(fā)生反應(yīng)，最后加入顯色底物(如果抗人Ig是用酶標(biāo)記的)或做放射自顯影(抗人Ig用125Ⅰ標(biāo)記)以顯示結(jié)果 (圖20-4)。

　　圖20-4 用免疫印跡法檢查患者血清中的HIV病毒抗體

　　第一步：經(jīng)電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離;

　　第二步：將已分離的抗原經(jīng)電印跡轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上;

　　第三步：將待檢病人血清加入覆蓋于硝酸纖維膜上;

　　第四步：加入標(biāo)記的第二抗體使之覆蓋膜上;

　　第五步：加入顯色底物(或放射自顯影)顯現(xiàn)第二抗體

　　(二)凝集反應(yīng)

　　細(xì)菌、紅細(xì)胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等都是不溶性的顆?？乖?dāng)與相應(yīng)抗體結(jié)合，抗原與抗體結(jié)合形成凝集團(tuán)塊，即稱為凝集反應(yīng)(agglutination)。

　　1.直接凝集 　直接凝集(direct agglutination)是將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。可用于傳染病診斷如肥達(dá)氏反應(yīng)(Widal reaction)診斷傷寒病?；蚶醚?xì)胞凝集現(xiàn)象檢查血型。

　　2.間接凝集 　間接凝集(indirect agglutination)是用可溶性抗原包被在乳膠顆?；蚣t細(xì)胞表面，與相應(yīng)抗體混合出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。如用γ球蛋白包乳膠顆粒檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人血清中的類風(fēng)濕因子，用甲狀腺球蛋白包被乳膠顆粒用于檢測甲狀腺球蛋的抗體。也可以將抗體吸附到乳膠顆粒上檢查臨床標(biāo)本中的抗原，如細(xì)菌或真菌性腦膜炎抗體包被的乳顆粒，一旦與含有相應(yīng)抗原的腦脊液混合，便可發(fā)生凝集，可進(jìn)行快速診斷。故凝集反應(yīng)即可測定抗原，也可測抗體，方法簡便、敏感。

　　3.抗球蛋白試驗 抗球蛋白試驗(antiglobulin test,coombs test)的原理為間接凝集試驗。例如應(yīng)用于診斷自身免疫溶血性貧血癥時，Rh+紅細(xì)胞與抗Rh血清間的反應(yīng)。因抗Rh抗體是IgG只有兩個結(jié)合價，分子較小(不如IgM結(jié)合價多，分子大)很難直接引起Rh+紅細(xì)胞凝集。如果加入抗IgG的抗體，就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細(xì)胞。也就是經(jīng)抗Ig的作用提高凝集反應(yīng)的靈敏度。

相關(guān)推薦：

2014年臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試免疫學(xué)復(fù)習(xí)資料總結(jié)

2014年臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師醫(yī)學(xué)免疫學(xué)歷年考點歸納匯總

2014臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試大綱-醫(yī)學(xué)免疫學(xué)（新）

編輯推薦：

臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師輔導(dǎo)報名

2014年臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試網(wǎng)絡(luò)輔導(dǎo)招生簡章

2014年臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師頂級輔導(dǎo)課程（簽訂協(xié)議?不過退費?免費重學(xué)）

國內(nèi)獨家揭秘：2013年臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師真題解析（免費高清直播公開課）