2012年初級(jí)檢驗(yàn)技士免疫檢驗(yàn)：TRFIA分析原理

　　在生物流體和血清中的許多復(fù)合物和蛋白本身就可以發(fā)熒光，因此使用傳統(tǒng)的發(fā)色團(tuán)進(jìn)而進(jìn)行熒光檢測(cè)的靈敏度就會(huì)嚴(yán)重下降。大部分背景熒光信號(hào)是短時(shí)存在的，因此將長(zhǎng)衰減壽命的標(biāo)記物與時(shí)間分辨熒光技術(shù)相結(jié)合，就可以使瞬時(shí)熒光干擾減到最小化。

　　時(shí)間分辨熒光分析法(TRFIA)實(shí)際上是在熒光分析(FIA)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，它是一種特殊的熒光分析。熒光分析利用了熒光的波長(zhǎng)與其激發(fā)波長(zhǎng)的巨大差異克服了普通紫外-可見分光分析法中雜色光的影響，同時(shí)，熒光分析與普通分光不同，光電接受器與激發(fā)光不在同一直線上，激發(fā)光不能直接到達(dá)光電接受器，從而大幅度地提高了光學(xué)分析的靈敏度。但是，當(dāng)進(jìn)行超微量分析的時(shí)候，激發(fā)光的雜散光的影響就顯得嚴(yán)重了。因此，解決激發(fā)光的雜散光的影響成了提高靈敏度的瓶頸。

　　解決雜散光影響的最好方法當(dāng)然是測(cè)量時(shí)沒有激發(fā)光的存在。但普通的熒光標(biāo)志物熒光壽命非常短，激發(fā)光消失，熒光也消失。不過有非常少的稀土金屬(Eu、Tb、Sm、Dy)的熒光壽命較長(zhǎng)，可達(dá)1～2ms，能夠滿足測(cè)量要求，因此而產(chǎn)生了時(shí)間分辨熒光分析法，即使用長(zhǎng)效熒光標(biāo)記物，在關(guān)閉激發(fā)光后再測(cè)定熒光強(qiáng)度的分析方法。

　　平時(shí)常用的稀土金屬主要是Eu(銪)和Tb(鋱)，Eu熒光壽命1ms，在水中不穩(wěn)定，但加入增強(qiáng)劑后可以克服;Tb熒光壽命1.6ms，水中穩(wěn)定，但其熒光波長(zhǎng)短、散射嚴(yán)重、能量大易使組分分解，因此從測(cè)量方法學(xué)上看Tb很好，但不適合用于生物分析，故Eu最為常用。

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