2013檢驗(yàn)主管技師考試臨床化學(xué)：血清總蛋白質(zhì)的測(cè)定

    點(diǎn)擊進(jìn)入：2013年檢驗(yàn)技師考試時(shí)間：5月18、19、25、26

　　新鮮全血采取后經(jīng)自然凝固，析出血清，除去含量約為2-4μg/L的纖維蛋白原，剩下的即為血清蛋白質(zhì)。健康成人在活動(dòng)狀態(tài)采血，其含量為 63-83g/L，平臥休息時(shí)為60-78g/L。血漿總蛋白質(zhì)含量的變化不外兩大原因;一是血容量的改變(濃縮或稀釋);二是個(gè)別蛋白質(zhì)組分的明顯增加或減少。血濃縮時(shí)的高血漿蛋白血癥，各個(gè)組分成比例的增加(病史中有失水史)。血稀釋時(shí)的低血漿蛋白血癥亦是相對(duì)的，各組分蛋白質(zhì)仍保持正常的比例。

　　由于個(gè)別蛋白質(zhì)的變化所致的低蛋白血癥，最多見(jiàn)的原因是低血漿白蛋白。輕度的高蛋白血癥可由于慢性感染性疾病引起的多克隆，彌散性的γ球蛋白增多癥是由于多發(fā)性骨髓瘤或異常蛋白血癥時(shí)單克隆免疫球蛋白增多。

　　應(yīng)當(dāng)指出，在進(jìn)行化學(xué)定量測(cè)定血漿蛋白質(zhì)時(shí)，我們作了如下假定：①所有血漿蛋白是純的多肽鏈(糖脂類和金屬有機(jī)物等均不計(jì)在內(nèi))，其含氮量平均為16%;②幾百種血漿蛋白其理化性質(zhì)雖不同，但與化學(xué)試劑作用產(chǎn)生的反應(yīng)(如呈色、沉淀)是一致的。顯然，這是過(guò)于理想化了的，事實(shí)上前一種情況是不存在的，后一種情況在不同蛋白質(zhì)之間也有很大的差別，因此采用任何一種化學(xué)方法作血漿蛋白質(zhì)的測(cè)定，嚴(yán)格來(lái)講都是從實(shí)用出發(fā)的，是相對(duì)的定量。

　　至今，凱氏定氮法仍然是建立各個(gè)具體方法時(shí)采用的參考標(biāo)準(zhǔn)方法。

　　雙縮脲比色法是目前首先推薦的蛋白質(zhì)定量方法。方法操作簡(jiǎn)便，雖然雙縮脲試劑有大同不異。其中酒石酸鉀納可以穩(wěn)定在堿性溶液中的銅離子，含有碘化物作為抗氧化劑。雙縮脲反應(yīng)生成的復(fù)合物其吸收峰為540nm?？刹捎霉J(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)精確稱量，必要時(shí)用凱氏定氮法標(biāo)定。各地質(zhì)控中心提供的混合標(biāo)準(zhǔn)血清可作為第二參考，血清用量100μl，在10-120g/L濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，批內(nèi)CV值<2%，其它常用的方法還有：

　　1.基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚試劑比色法 由于各種蛋白質(zhì)分子中上述兩種氨基酸的組成比例不同，特別是白蛋白含色氨酸為0.2%，而γ-球蛋白中含量達(dá)2%-3%，導(dǎo)致較大的差異。Lowry的改良法在酚試劑中加入Cu2+，集中原法和雙縮脲反應(yīng)兩者的作用，使呈色靈敏度提高。其中75%的呈色依賴于Cu2+。反應(yīng)產(chǎn)物最佳吸收峰在 650-750nm，方法靈敏度為雙縮脲方法的100倍左右。有利于檢測(cè)較微量的蛋白質(zhì)。但試劑反應(yīng)仍易受多種化合物的干擾。

　　2.采用280nm和215/225紫外吸收值，計(jì)算蛋白質(zhì)含量　280nm 是由于蛋白質(zhì)分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特異性和準(zhǔn)確性受蛋白分子中該種氨基酸的含量比例影響甚大。尿酸和肝紅素在280nm附近有干擾。紫外區(qū) 200-225nm是肽健的強(qiáng)吸收峰。在此區(qū)域其吸收值為280nm的10-30倍，將血清稀釋1000-2000倍可以消除干擾物質(zhì)的影響。

　　3.采用沉淀反應(yīng)進(jìn)行散射比濁法　用磺柳酸、三氯醋酸等配方，此方法甚為簡(jiǎn)便，不需特殊儀器，技術(shù)關(guān)鍵在于：①選擇最佳試劑濃度及溫度;②混勻技術(shù);③選用的標(biāo)準(zhǔn);④待測(cè)標(biāo)本中的蛋白濃度。

　　4.染料結(jié)合法 蛋白質(zhì)可與某些染料特異結(jié)合，如氨基黑(amino black)與考馬亮藍(lán)(comassive brilliant blue )。這一性質(zhì)除了可以用于電泳后的蛋白質(zhì)區(qū)帶染色，亦可用于總蛋白質(zhì)的定量。缺點(diǎn)是多種蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力不一致?？捡R亮藍(lán)在與蛋白質(zhì)結(jié)合后的吸收峰從 465nm移向595nm，這一性質(zhì)可用分光光度法來(lái)定量檢測(cè)。

　　關(guān)于用化學(xué)方法測(cè)定白蛋白，現(xiàn)多采用特異性的染料(BCG或BCP)結(jié)合法。

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