瘋牛病組織病理學(xué)方法診斷技術(shù)

　　本方法耗時較長，約需14天才能出結(jié)果。用本方法診斷瘋牛病時必須有較高的專業(yè)水平和豐富的神經(jīng)病理學(xué)觀察經(jīng)驗(yàn)。在組織切片效果較好時，確診率可達(dá)90%.

　　瘋牛病組織病理學(xué)檢測方法的主要步驟如下。

　?。?）樣品準(zhǔn)備病牛宰殺后，要盡快用特制采樣勺用電鋸或砍刀將牛的顱腔打開取出腦干。腐爛的牛腦不能用于組織病理學(xué)檢查。將取出的腦組織立即投入到新鮮配制的10%福爾馬林溶液中固定1周，固定完后在腦閂部、前丘部、小腦后腳部橫切一塊3～4mm厚的組織塊，用新鮮配制的固定液中再固定3天。

　?。?）脫甲醛將固定好的組織塊放人流水中漂洗24h.

　?。?）脫水依次用75%酒精、85%酒精、95%酒精和100%酒精浸泡處理組織塊，使其水分充分脫去。

　?。?）透明脫完水的組織塊用二甲苯浸泡透明。

　?。?）浸蠟與包埋透明好的組織塊立即投入到軟蠟和硬蠟中處理，充分浸透石蠟，然后用硬蠟包埋組織塊。

　?。?）切片將包埋好的組織塊切成5/lm厚的切片，用貼附有黏片劑的載玻片貼片，并放人干燥箱中烘烤玻片，使組織切片貼附更緊，實(shí)驗(yàn)肘才不容易掉片。

　?。?）H.E染色在二甲苯、不同濃度的酒精處理切片后，用哈里斯酸性蘇木精和伊紅處理切片，然后再用不同濃度的酒精和二甲苯處理切片，最后用中性樹膠封片。

　?。?）光學(xué)顯微鏡觀察在光學(xué)顯微鏡下（10X10、10X20、10X40）觀察切片，被檢樣品腦干灰質(zhì)區(qū)特別是腦閂部位的孤束核、迷走神經(jīng)背核、三叉神經(jīng)脊束核、紅接和動跟神經(jīng)核等處的神經(jīng)元核周體或神經(jīng)纖維網(wǎng)胞漿中出現(xiàn)雙側(cè)對稱性海綿狀空泡病變，且空袍呈現(xiàn)則的圓形或橢圓形，周邊整齊，則可判定為BSE陽性。在正常情況下，動眼神經(jīng)核稿紅核處的核周體也可能有少量空泡出現(xiàn)，但不呈雙側(cè)對稱，應(yīng)注意區(qū)別。

　　若在腦干灰質(zhì)區(qū)未發(fā)現(xiàn)雙側(cè)對稱性海綿狀空泡病變，則用免疫組織化學(xué)方法做進(jìn)一步診斷。