2014執(zhí)業(yè)藥師考試輔導(dǎo)：雜質(zhì)檢查

　　雜質(zhì)檢查相關(guān)知識點整理如下，希望對參加執(zhí)業(yè)藥師考試的考生們有所幫助。

　　藥物的雜質(zhì)(purity)是指藥物中存在的無治療作用或影響藥物穩(wěn)定性和療效，甚至對人體健康有害的物質(zhì)。

　　藥物純度(purities of drugs)：指藥物的純凈程度。主要從用藥的安全、有效和穩(wěn)定性方面考慮。

　　化學(xué)試劑中的雜質(zhì)是指能夠引起對化學(xué)使用目的有影響的物質(zhì)。

　　藥政管理部門規(guī)定，不能以一般化學(xué)藥品及化學(xué)試劑代替藥用規(guī)格，更不能把化學(xué)試劑當(dāng)作藥品直接應(yīng)用于臨床治療。

　　檢查項下包括有效性、均一性、純度要求與安全性四個方面。

　　雜質(zhì)的來源：生產(chǎn)過程中引入;貯藏過程中產(chǎn)生

　　雜質(zhì)的種類:

　　按來源分為一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)：

　　一般雜質(zhì)：指在自然界中分布廣泛，在多種藥物的生成和儲藏過程中容易引入的雜質(zhì)。

　　特殊雜質(zhì)：指在特定藥物的生成和儲藏過程中引入的雜質(zhì)，這類雜質(zhì)隨藥物的不同而不同。

　　按毒性分為信號雜質(zhì)和有害雜質(zhì)：

　　毒性雜質(zhì)：如重金屬、砷鹽。

　　信號雜質(zhì)：一般無毒，但其含量的多少反映出藥物的純度情況，如果藥物中信號雜質(zhì)含量過多，提示該藥的生產(chǎn)工藝或生產(chǎn)控制有問題，如氯化物、硫酸鹽。

　　按理化性質(zhì)分為無機(jī)雜質(zhì)、有機(jī)雜質(zhì)及殘留溶劑

　　雜質(zhì)限量

　　雜質(zhì)限量：指藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，通常用百分之幾或百萬分之幾(ppm)來表示。

　　限量檢查(Limit test)：藥物中的雜質(zhì)在不影響療效和不發(fā)生毒性的原則下允許有一定限量。

　　通常不測定其準(zhǔn)確含量，只檢查雜質(zhì)的量是否超過限量，所以稱為雜質(zhì)的限量檢查。

　　藥物的雜質(zhì)檢查法：按操作方法分為對照法(限量檢查法)、.靈敏度法、比較法。

　　對照法：指取一定量的被檢雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和一定量供試品溶液，在相同條件下處理，比較反應(yīng)結(jié)果，以確定雜質(zhì)含量是否超過限量。(比色、比濁、比色斑)

　　靈敏度法：指在供試品溶液中加入一定量的試劑，在一定反應(yīng)條件下，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)，從而判斷供試品中雜質(zhì)是否符合限量規(guī)定。

　　比較法：取供試品一定量依法檢查，測得待檢雜質(zhì)的參數(shù)(如吸收度)與規(guī)定的限量比較，不得更大。

　　☆一般雜質(zhì)檢查：

　　酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、硫化物、硒、氟、氰化物、鐵鹽、重金屬、砷鹽、銨鹽、易炭化物、干燥失重、熾灼殘渣、水分測定、溶液顏色與澄清度以及有機(jī)溶劑殘留量等。 遵循平行操作原則

　　☆氯化物檢查法：

　　原理：對照法。 利用氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀膠體微粒而顯白色混濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀混濁程度比較，濁度不得更大。 Cl-+Ag+―>AgCl↓(白)

　　注意事項：

　?、?氯化物濃度以50ml溶液中含50～80μg的Cl為宜，因為此時濁度梯度好。

　?、?加硝酸可避免弱酸銀鹽如碳酸銀、磷酸銀以及氧化銀沉淀的干擾，加速AgCl的生成并產(chǎn)生較好的乳光渾濁

　?、?酸度要求：50ml供試溶液中含稀硝酸10ml為宜

　?、?供試品溶液有顏色時的處理方法：內(nèi)消色法：

　?、?供試品溶液顯堿性的處理方法：先中和成中性后再檢查(加硝酸)

　　⑥ 供試品溶液不澄清的處理方法：過濾，之前要用硝酸沖洗濾紙。

　　☆硫酸鹽檢查法

　　原理：藥物中存在的微量硫酸鹽與氯化鋇在鹽酸酸性介質(zhì)中生成硫酸鋇白色混濁，與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件下生成的混濁比較，濁度不得更大。

　　注意事項：鹽酸可防止碳酸鋇或磷酸鋇等沉淀的生成，酸度過大可使硫酸鋇溶解，以50ml供試溶液中含稀鹽酸2ml為宜。

　　☆鐵鹽檢查法

　　方法：①硫氰酸鹽法 Ch.P、USP;②巰基醋酸法 BP

　　原理：鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸銨溶液作用生成紅色可溶性的硫氰酸鐵配離子，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后進(jìn)行比色。 Fe3+ +nSCN-→[Fe(SCN)n]3-n (n=1~6)

　　注意事項：

　?、?準(zhǔn)鐵貯備液的配制：用硫酸鐵銨[FeNH4(SO4)2•12H2O]配制成標(biāo)準(zhǔn)鐵儲備液，并加入硫酸防止鐵鹽水解，使易于保存。

　　② 鐵鹽的最適檢測濃度范圍：目視比色時以50ml溶液中含有10-50μgFe3+為宜，所顯色澤梯度明顯。

　?、?應(yīng)在鹽酸酸性條件下進(jìn)行：加入鹽酸可防止Fe3+水解，并避免弱酸鹽如醋酸鹽、磷酸鹽、砷酸鹽等的干擾

　?、?入過硫酸胺的目的：為了氧化Fe2+為Fe3+，同時可防止由于光照使硫氰酸鐵還原或分解褪色。

　　2 Fe2++(NH4)2S2O8 →2 Fe3++(NH4)2SO4+SO42-

　?、?為了提高靈敏度或供試管與對照管色調(diào)不一致時，可用正丁醇或異戊醇提取后，分取醇層比色。例：枸櫞酸鈉中鐵鹽的檢查

　?、?硫氰酸銨過量：增加配位離子的穩(wěn)定性，提高反應(yīng)靈敏度，還能消除Cl-、PO43-、SO42-、枸櫞酸跟離子等與鐵鹽形成配位化合物而引起的干擾。

　　☆重金屬檢查法：

　　重金屬：系指在實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。如銀、鉛、汞、銅、鉻、鎘、鉍、銻、砷、鋅、鈷、鎳等。以鉛的限量表示重金屬限度。第一法：硫代乙酰胺法;第二法：熾灼后的硫代乙酰胺法;第三法：硫化鈉法;第四法：微孔濾膜法

　　第一法 硫代乙酰胺法

　　適用范圍：溶于水、稀酸和乙醇的藥物。此法最常用。

　　原理：硫代乙酰胺在弱酸性條件(醋酸鹽緩沖液pH3.5)下水解產(chǎn)生硫化氫，與微量重金屬離子生成黃色到棕黑色的硫化物混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液(PbNO3)經(jīng)同法處理后所呈顏色比較，顏色不得更深(比色)。

　　CH3CSNH2+H2O―>CH3CONH2+H2S; Pb2++H2S―>PbS↓+2H+ (Ph3.5)

　　注意事項：

　?、?本反應(yīng)的pH對顯色有很大影響。用醋酸鹽緩沖溶液控制pH值在3～3.5，硫化鉛的沉淀比較完全。酸度增大，呈色變淺甚至不呈色，強(qiáng)酸處理過的溶液必須先用NH3?H2O調(diào)pH值至中性。

　?、?試品溶液有顏色的處理：內(nèi)消色法、外消色法

　　外消色法：在對照管溶液中滴加少量稀焦糖溶液(取蔗糖用小火加熱后，再混懸于水中做成。隨加熱溫度與時間的不同，其水溶液呈黃至紅棕色。根據(jù)供試液顏色，適當(dāng)掌握蔗糖的加熱程度)，使之與供試品溶液管的顏色一致。

　　③ 供試品中若有微量高鐵鹽存在，會氧化硫化氫生成單質(zhì)硫，干擾比色?？稍趦晒苤屑尤肟箟难?.5~1.0g，使Fe3+還原為Fe2+，再依法檢查。

　　第二法 熾灼后的硫代乙酰胺法

　　適用范圍：適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇及堿的有機(jī)藥物。

　　注意事項：

　?、?溫度對重金屬檢查影響較大，溫度越高重金屬損失越多，應(yīng)控制熾灼溫度 500-600℃(高溫易揮發(fā)).

　?、?殘渣加硝酸加熱處理后，必須蒸干，除盡氧化氮，否則亞硝酸可氧化硫化氫析出硫，影響比色。

　?、?含鈉及氟的有機(jī)藥物應(yīng)用鉑坩堝、石英坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿，因可腐蝕瓷坩堝帶入重金屬。

　　第三法 硫化鈉法

　　適用范圍：適用溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類、巴比妥類。

　　原理：在堿性介質(zhì)中，以硫化鈉為顯色劑，使Pb2+生成PbS微粒的混懸液，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較，不得更深(比色)。

　　第四法 微孔濾膜法

　　適用范圍：適用于重金屬限度低(含重金屬雜質(zhì)2-5μg)的藥物。

　　原理：同第一法

　　☆砷鹽檢查法 As 注意點：藥物中的砷鹽多由生產(chǎn)過程中使用的無機(jī)試劑引入

　　砷鹽檢查法的常用方法：①古蔡氏法 Ch.P、BP、JP;②二乙基二硫代氨基甲酸銀法(Ag(DDC)法)Ch.P、USP;③白田道夫法 Ch.P

　　古蔡氏法(Gutzeit)

　　原理：利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中的微量砷鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液(臨用新配，2ml)在同樣條件下生成的砷斑比較，判定藥物中砷鹽的限量。

　　Zn+HCl―>H2+AsO32+(As3+)―>AsH3

　　• As3+ +3Zn +3H+ →3Zn2+ + AsH3

　　• AsO33- +3Zn +9H+→3Zn2+ +3H2O + AsH3

　　• AsO43- +4Zn+11H+→4Zn2+ +4H2O+ AsH3

　　• AsH3 + 3HgBr2→3HBr + As(HgBr)3 (黃色)

　　• 2As(HgBr)3+ AsH3→3AsH(HgBr)2 (棕色)

　　• As(HgBr)3+ AsH3→3HBr + As2Hg3 (棕黑色)

　　碘化鉀和氯化亞錫的作用

　　• 碘化鉀還原 As5+為 As3+及 Fe3+還原為 Fe2+，加快反應(yīng)速度。

　　• 碘化鉀被氧化生成的I2又可被氯化亞錫還原為I-，I-與反應(yīng)中生成的Zn2+能形成穩(wěn)定的配位離子有利于生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行。(交替還原作用)

　　AsO43++2I-+H+―>AsO33-+I2+H2O

　　AsO43++Sn2++H+―> AsO33-+Sn4++H2O

　　I2+ Sn2+―>2I-+ Sn4+

　　4I-+Zn2+―>[ZnI4]

　　• 氯化亞錫及碘化鉀可抑制銻化氫生成，防止銻斑形成干擾。在實驗條件下，100gSb存在不干擾測定。

　　• 氯化亞錫與鋅作用生成鋅錫齊，在鋅表面形成形成局部電池，使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生。

　　SnCl2 + Zn → Zn-Sn

　　醋酸鉛棉花作用：吸收硫化氫氣體，也可控制砷化氫以是以速度通過。

　　鋅粒及供試品可能含有少量硫化物

　　中國藥典(2005 年版)附錄規(guī)定用醋酸鉛棉花60mg，裝管高度約60mm~80mm。

　　HgBr2試紙：與砷化氫作用較氯化汞試紙靈敏，但其砷斑不穩(wěn)定，在反應(yīng)中應(yīng)保持干燥及避光，且立即與標(biāo)準(zhǔn)品比較。

　　其他：

　　供試品若為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等，加硝酸處理，過量的硝酸及產(chǎn)生的氮的氧化物應(yīng)蒸干

　　除盡。枸櫞酸鐵銨中砷鹽的檢查

　　供試品若為鐵鹽，需加酸性氯化亞錫，將高鐵離子還原為低鐵離子后再檢查。

　　共價鍵結(jié)合的砷化物：先要有機(jī)破壞，破壞方法有堿破壞法或酸破壞法，ChP 常采用前者。

　　藥物為銻鹽時，產(chǎn)生灰色銻斑，干擾比色，應(yīng)改用白田道夫法。

　　原理：氯化亞錫在鹽酸中能將砷鹽還原成棕褐色的膠態(tài)砷，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液用同法處理后的顏色進(jìn)行比較，即可判斷供試品的含砷量。 2As3+ + 2SnCl + 6HCl―>2As + 2SnCl4 + 6H+

　　用于有銻(灰色銻斑)干擾時的補(bǔ)充法。

　　優(yōu)點：不受銻干擾. 缺點：靈敏度低，若加入少量HgC12,靈敏度提高

　　☆熾灼殘留檢查法(700oC―800oC)

　　恒重：供試品連續(xù)兩次干燥或熾灼后的重量差異在 0.3mg 以下。

　　熾灼殘渣：系指有機(jī)藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無機(jī)藥物加熱分解后，高溫?zé)胱?，所殘生的非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)的硫酸鹽。 此法用于控制有機(jī)藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無機(jī)藥物中非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)。

　　熾灼至恒重的第二次稱重應(yīng)在繼續(xù)熾灼30分鐘后進(jìn)行。

　　☆干燥失重測定法

　　干燥失重：系指藥物在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的量，以百分率表示。

　　干燥失重主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性物質(zhì)。

　　干燥至恒重的第二次及以后各次稱重應(yīng)在規(guī)定的條件下繼續(xù)干燥1小時后進(jìn)行

　　1. 常壓干燥法：適用于受熱較穩(wěn)定的藥物。與干燥至恒重的稱量瓶中，105oC下干燥

　　①平鋪于稱量瓶，符合厚度要求，放冷再稱重;

　?、诤^多結(jié)晶水的藥物，105oC不易除去結(jié)晶水，可提高溫度(硫酸嗎啡);

　?、勰承┧幬镏泻休^大量的水分，熔點又低，可先低溫加熱，在慢慢加熱至105oC干燥至恒重(硫代硫酸鈉);

　?、苣承┮孜被蚴軣岚l(fā)生相變而達(dá)不到恒重的藥物，可采用一定溫度下、干燥一定時間所減失的重量代表干燥失重。

　　2. 減壓干燥法與恒溫減壓干燥法：適用于熔點低或受熱分解的供試品。木糖醇

　　3. 干燥劑干燥法：適用于受熱易分解或易生華的供試品。常用干燥劑：硅膠、硫酸、五氧化二磷….

　　4. 熱分析法：

　　☆殘留溶劑測定法:

　　ICH 按有機(jī)溶劑毒性的程度分為三類：一類:應(yīng)盡量避免使用;二類:應(yīng)限制使用;三類:推薦使用

　　氯仿(二類)、甲醇(二類)、吡啶(二類)、苯(一類)、乙酸乙酯(三類)

　　氣相色譜法檢查有機(jī)溶劑：第一法：溶液直接進(jìn)樣法(填充柱); 第二法：頂空進(jìn)樣法(毛細(xì)管柱)

　　☆水分測定法

　　• 藥品中的水分包括結(jié)晶水和吸附水。

　　• 《中國藥典》(2005年版)采用費休氏法和甲苯法測定藥物中的水分，尤以費休法為主。

　　• 利用I2氧化SO2為SO3時，需要一定量的水分參加反應(yīng)。