2014主管檢驗技師輔導：巨噬細胞功能的檢測

　　巨噬細胞功能的檢測是醫(yī)學檢驗主管技師考試所涉及的內容，環(huán)球網校醫(yī)學考試網整理如下，供廣大醫(yī)學檢驗主管技師考試考生參考學習。

　　(一)炭粒廓清試驗

　　正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10%炭粒，據此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。

　　(二)吞噬功能的檢測

　　巨噬細胞具有較強的吞噬功能，實驗室常用比細菌大的細胞性抗原作為被吞噬顆粒，如雞紅細胞。其檢測原理是將受檢細胞與適量的顆?？乖旌虾?，置37℃保溫0.5～1h，其間時加振搖，最后離心取測定細胞制成涂片，染色鏡檢，分別計數出吞噬百分比和吞噬指數。各實驗室應根據自己的條件建立正常參考值。

　　(三)巨噬細胞溶酶體酶的測定

　　巨噬細胞富含溶酶體酶，如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、溶菌酶等，測定這些酶的活性也是衡量巨噬細胞功能的實用指標之一。

　　1.酸磷酸酶的測定

　　(1)硝酸鉛法：本法優(yōu)點是用普通試劑，價格便宜，一般實驗室均有條件做，封片后可較長時間保存，并可用電子顯微鏡研究觀察細胞的超微結構。缺點是細胞必需固定，而且固定條件要求嚴格，如處理不當酶活性易消失，反應步驟也較多。

　　該法基本原理是在適當的酶性條件下，巨噬細胞內的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸鈉水解成磷酸鹽后，后者與硝酸鉛反應產生磷酸鉛，而磷酸鉛再與硫酸銨反應則形成黑色硫化鉛，沉積在胞漿內酸所在處，顯示棕黑色顆粒。酶活性強弱可根據顆粒的數量和粗細不同而分級判斷，顆粒數量少則細的為+，顆粒多而粗的為++，顆粒很多且很粗的為+++。

　　(2)偶氮法：本法操作簡便，反應液中的底物α-萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸鹽，而萘酚結構中的羥基(-OH)鄰近的活潑碳原子，立即與偶氮染料起反應，而產生鮮艷的棕色沉積在酶所在處，缺點是封片后保存時間短。

　　2.非特異性酶的測定該酶比較穩(wěn)定，酶活性喪失較慢，細胞經涂片干燥，置室溫至少可保存半天至一天，因此特別有利于臨床檢驗室采用。

　　常用α-萘醋酸法，該酶可將-萘醋酸分解成萘酚和醋酸，萘酚迅速與偶染料結合，形成有色反應物而沉積。

　　(四)巨噬細胞促凝血活性測定

　　激活巨噬細胞可產生一種與膜結合的凝血活性因子，加速正常血漿的凝固，為此取已經37℃預溫的正常兔血漿和CaC12混合液，加入經粘附單層巨噬細胞的試管中，移置37℃，即時記錄血漿凝固時間。實驗證明當巨噬細胞與LPS、腫瘤相關抗原或HbsAg等溫育后，可見血漿凝固時間明顯縮短。本法穩(wěn)定方便，也是檢測不同疾病患者巨噬細胞功能的指標之一。

　　(五)巨噬細胞表面受體的檢測

　　成熟的巨噬細胞表面具有Fc受體和C3b受體，這些受體能識別經IgG和C3b調理的顆粒，并迅速與之結合，促使細胞對相應顆粒的吞噬，為此檢測這些受體可間接判斷巨噬細胞的功能。常用抗羊紅細胞致敏的羊紅細胞懸液作指示物進行EA花環(huán)試驗，也可用抗原(E)抗體(A)補體(C)復合物作EAC花環(huán)試驗。由于操作繁鎖，現(xiàn)僅供研究用。

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