2012年初級(jí)檢驗(yàn)技士免疫檢驗(yàn)：HLA抗體的臨床意義及檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展

　　1 與器官移植的關(guān)系：

　　許多資料表明，HLA抗體可以導(dǎo)致針對(duì)移植物的免疫反應(yīng)而發(fā)生超急排和加速性排斥反應(yīng)，使移植失敗或降低移植物存活率。在器官移植中，供受雙方的HLA相容性越大，移植成功率越高。最近一項(xiàng)國(guó)際合作的研究結(jié)果顯示，對(duì)36個(gè)移植中心的4763例器官移植患者檢測(cè)HLA抗體，腎移植HLA抗體檢出率是20. 9%，肝移植19. 3%，心臟移植22. 8%，肺臟移植14.2%.另一項(xiàng)在23個(gè)腎移植中心開(kāi)展的檢測(cè)HLA抗體預(yù)測(cè)移植1年內(nèi)失敗頻率的研究中， 2278例腎移植病人中有HLA抗體的移植失敗率為6. 6% ; 1778無(wú)HLA抗體的病人移植失敗率為3. 3%.結(jié)果顯示有HLA抗體移植病人的失敗率明顯高于無(wú)抗體的病人。另外HLA抗體的濃度與移植存活密切相關(guān)。M o n te iro等對(duì)124例腎移植患者隨訪發(fā)現(xiàn)，術(shù)后PRA(群體反應(yīng)性抗體)> 50%的患者中85%需透析，PRA 10%的患者移植腎喪失的幾率是PRA< 10%患者的3倍。國(guó)內(nèi)外研究者一致認(rèn)為移植前受者體內(nèi)PRA水平的檢測(cè)對(duì)于是否發(fā)生移植排斥反應(yīng)有著顯著影響 2 ，移植后受者體內(nèi)PRA水平對(duì)于移植物存活率的高低，移植轉(zhuǎn)歸以及移植后的器官功能都有著重要作用 3 .最新資料顯示HLA抗體是引起急排的始動(dòng)因素，HLA-I類(lèi)抗體出現(xiàn)后平均約634d移植失敗，HLA-II類(lèi)抗體出現(xiàn)后平均約1503d移植失敗，病人體內(nèi)可清楚檢測(cè)到供者的特異性抗體 4 .隨著檢測(cè)HLA抗體方法的靈敏度的進(jìn)一步提高，移植失敗患者體內(nèi)HLA抗體的檢出率上升到95% 5 ，幾乎所有的移植排斥均可檢測(cè)到HLA抗體。 中 華 考 試 網(wǎng)

　　2 與輸血的關(guān)系：

　　HLA抗原存在于所有的有核細(xì)胞，在淋巴細(xì)胞上的密度最高，幼稚紅細(xì)胞和血小板都帶有HLA抗原。因此在輸注全血，紅細(xì)胞懸液，粒細(xì)胞，血小板等血液成分時(shí)都有可能發(fā)生因HLA抗原型不同而引起的各類(lèi)非溶血性輸血反應(yīng)，影響輸血治療的效果。盡管現(xiàn)在使用了白細(xì)胞濾器，全血或紅細(xì)胞懸液輸注的非溶血性輸血反應(yīng)得到有效的控制，但粒細(xì)胞和血小板的輸注依然存在問(wèn)題。大多數(shù)發(fā)熱反應(yīng)與多次輸入HLA不相合的白細(xì)胞，血小板有關(guān)。有資料顯示發(fā)熱反應(yīng)患者的微量淋巴細(xì)胞毒反應(yīng)多數(shù)呈陽(yáng)性，輸血次數(shù)與陽(yáng)性反應(yīng)發(fā)生率呈平行關(guān)系。由于多次接受HLA不相合的白細(xì)胞，血小板，受血者血中產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，再次接受輸血時(shí)，發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，激活補(bǔ)體，進(jìn)一步引起白細(xì)胞，血小板溶解而釋放熱源，導(dǎo)致發(fā)熱反應(yīng)。同時(shí)由于個(gè)體間差異能激發(fā)產(chǎn)生同種抗體，也可引起發(fā)熱反應(yīng)。對(duì)于血小板輸注而言，給具有HLA抗體的患者輸注血小板，抗體可與輸入的血小板反應(yīng)，造成血小板輸注無(wú)效。

　　3 與妊娠的關(guān)系：

　　妊娠婦女由于母胎HLA不合或輸血免疫反應(yīng)可以產(chǎn)生白細(xì)胞抗體，抗體隨著妊娠次數(shù)的增加而相應(yīng)增高。這種HLA抗體屬于IgG，可以通過(guò)胎盤(pán)，使胎兒產(chǎn)生同種免疫性中性粒細(xì)胞減少癥及同種免疫性血小板減少性紫癜?，F(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為，母胎HLA相容性越大，母體就不能識(shí)別胚胎抗原，就不能產(chǎn)生封閉抗體，胚胎得不到封閉抗體的保護(hù)而遭排斥，即產(chǎn)生病理性妊娠。有資料表明HLA抗體與病理性妊娠如流產(chǎn)，不孕，妊高癥和早產(chǎn)等均有一定關(guān)系 6 .胡興等進(jìn)一步證實(shí)妊高癥組HLA抗體在顯著低于對(duì)照組，尤其以HLA-II類(lèi)抗體的下降更為顯著，這說(shuō)明HLA抗體，尤其是HLA-II類(lèi)抗體的下降或缺乏在妊高癥的發(fā)病及病情進(jìn)展中有著重要的作用 7 ，國(guó)外也有類(lèi)似報(bào)道

　　4 .HLA抗體的檢測(cè)方法

　　1）微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)(CDC)：該實(shí)驗(yàn)是由美國(guó)洛杉磯加州大學(xué)的Pau l.T e ra sak i教授于1964年創(chuàng)建。主要原理是淋巴細(xì)胞具有HLA抗原，HLA抗體能結(jié)合到帶有相應(yīng)抗原的淋巴細(xì)胞膜上，補(bǔ)體可以結(jié)合并在淋巴細(xì)胞膜上使其死亡。如果淋巴細(xì)胞不帶有相應(yīng)的抗原，則無(wú)此作用。通過(guò)染色來(lái)觀察細(xì)胞是否死亡來(lái)確定相應(yīng)的抗原或抗體。該方法可迅速檢測(cè)患者的HLA抗體，但需要分離細(xì)胞，抗原用量大且敏感性不高，多年來(lái)在臨床廣泛應(yīng)用。

　　2） 酶聯(lián)免疫法(EL ISA)：該實(shí)驗(yàn)的基本原理是將HLA抗原包被在一個(gè)孔內(nèi)，將患者血清加入孔中與孔內(nèi)的HLA抗原反應(yīng)，通過(guò)酶作用使其顯色，用熒光儀根據(jù)吸收光的不同來(lái)判斷結(jié)果。這種方法無(wú)需分離細(xì)胞，敏感性也有所提高，無(wú)需專(zhuān)門(mén)儀器設(shè)備，同時(shí)可檢出HLA-I類(lèi)和HLA-II類(lèi)抗體。但該方法操作繁瑣，也較費(fèi)時(shí)，一次只能檢測(cè)一個(gè)指標(biāo)，因此臨床應(yīng)用受到一定限制。

　　3） 流式細(xì)胞儀法(F lowCy tom e t ry)及單抗原磁珠法(L um inexTMF lowCy tom e t ry)：這兩種方法的基本原理323陜西醫(yī)學(xué)雜志2005年3月第35卷第3期都是將HLA單價(jià)抗原包被在不同顏色的微磁珠表面，用被檢測(cè)血清與磁珠反應(yīng)，血清中HLA特異性抗體便與包被在磁珠上的抗原結(jié)合，然后再與標(biāo)記PE的二抗孵育。根據(jù)熒光強(qiáng)弱通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)出與這些磁珠對(duì)應(yīng)的HLA抗體。這兩種方法在酶聯(lián)免疫法的基礎(chǔ)上使敏感性明顯提高，排除其它非反應(yīng)抗原的干擾，可準(zhǔn)確確定HLA抗體的特異性。單抗原磁珠法(L um inexTMF lowCy tom e t ry)在普通流式細(xì)胞儀基礎(chǔ)上進(jìn)一步改進(jìn)，并通過(guò)分析軟件的更新，對(duì)于較弱的反應(yīng)抗體也能準(zhǔn)確檢出。

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