初級(jí)檢驗(yàn)技士輔導(dǎo)：炭疽芽胞桿菌微生物檢驗(yàn)

　　初級(jí)檢驗(yàn)技士輔導(dǎo)：炭疽芽胞桿菌微生物檢驗(yàn) $lesson$

　　微生物檢驗(yàn)

　　(1)標(biāo)本采集：皮膚炭疽取病灶分泌物;肺炭疽取痰液;腸炭疽取糞便或嘔吐物;炭疽腦膜炎取腦脊液;各型炭疽均可采取血液。

　　(2)檢驗(yàn)方法及鑒定：炭疽桿菌的檢驗(yàn)要特別注意芽孢型的實(shí)驗(yàn)室感染。

　　1)直接鏡檢：將可疑材料涂片，1：1000的升汞固定5分鐘，再行革蘭染色和莢膜染色。鏡檢發(fā)現(xiàn)有莢膜的革蘭陽(yáng)性、兩端平截、竹節(jié)狀排列形成長(zhǎng)鏈桿菌，可作初步報(bào)告。

　　2)分離培養(yǎng)：一般接種血瓊脂平板，35℃培養(yǎng)18-24h后可觀察到較大、灰白色、邊緣不整齊和有輕微溶血的菌落。

　　3)鑒定

　?、俅樵囼?yàn)：將待檢菌接種于含青霉素0.05―0.5U/ml的培養(yǎng)基經(jīng)37℃培養(yǎng)6h后，炭疽桿菌可發(fā)生形態(tài)變化，顯微鏡下見(jiàn)大而均勻的圓球狀菌體呈成串樣排列，類(lèi)炭疽桿菌及其他需氧菌無(wú)此現(xiàn)象。本試驗(yàn)鑒別意義較大。

　?、谑删w裂解試驗(yàn)：

　　取用37℃、4-6h待檢肉湯培養(yǎng)物，涂布于普通瓊脂平板，將AP631炭疽噬菌體1滴，于平板中央劃一直線(xiàn)，置37℃18h，出現(xiàn)噬菌斑或噬菌帶者為陽(yáng)性，每份標(biāo)本應(yīng)作2-3個(gè)同樣的試驗(yàn)，同時(shí)滴種肉湯液作陰性對(duì)照。

　?、壑靥妓猁}生長(zhǎng)毒力試驗(yàn)：

　　將待檢菌接種于含0.5%NaHCO3和10%馬血清的瓊脂平板上，置10%CO2環(huán)境37℃24-48h，有毒株形成莢膜，菌落呈粘液型，無(wú)毒株不形成莢膜，呈粗糙型菌落。

　?、芮嗝顾匾种圃囼?yàn)：

　　將待檢菌分別接種于青霉素5、10、100U/ml的普通瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h，炭疽芽胞桿菌一般在含5U/ml的青霉素平板上仍能生長(zhǎng)，在含10、100U/ml青霉素的平板上受到抑制而不生長(zhǎng)。

　　⑤植物凝集試驗(yàn)：

　　炭疽桿菌菌體多糖是某些植物凝集素受體，用凝集素試驗(yàn)檢測(cè)炭疽桿菌。常用的方法有熒光標(biāo)記試驗(yàn)和酶聯(lián)凝集素吸附試驗(yàn)。本試驗(yàn)可與其他類(lèi)炭疽芽胞桿菌相鑒別。

　　5)判斷標(biāo)準(zhǔn)：

　　革蘭陽(yáng)性、兩端平整、竹節(jié)狀成雙或短鏈排列，有莢膜的粗大桿菌，或莢膜腫脹試驗(yàn)陽(yáng)性，串珠試驗(yàn)陽(yáng)性;重碳酸鹽毒力試驗(yàn)出現(xiàn)粘液型菌落可作出診斷。

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