初級(jí)檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

　　初級(jí)檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

　　酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

　　(1)基本原理

　　酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)屬固相酶免疫測(cè)定方法，了解其原理：根據(jù)顏色深淺進(jìn)行定性或定量分析。

　　(2)方法類型及反應(yīng)原理

　　ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體;②酶標(biāo)記的抗原或抗體;③酶作用的底物。

　?、匐p抗體夾心法：是檢測(cè)抗原最常用的方法。也可用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。

　?、陔p位點(diǎn)一步法：這種方法不但簡(jiǎn)化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高。

　　③間接法測(cè)抗體：是檢測(cè)抗體最常用的方法，其原理是利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。

　?、芨?jìng)爭(zhēng)法：競(jìng)爭(zhēng)法可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。

　　⑤捕獲法測(cè)IgM抗體：血清中針對(duì)某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時(shí)存在，后者會(huì)干擾IgM抗體的測(cè)定。因此測(cè)定IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清IgM(包括特異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再測(cè)定特異性IgM。

　?、迲?yīng)用親和素和生物素的ELISA：親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。生物素又稱維生素H，存在于蛋黃中。親和素與生物素結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，但特異性強(qiáng)，親和力大，兩者一經(jīng)結(jié)合極為穩(wěn)定。

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