2018年檢驗技師免疫學檢驗重要考點：化學發(fā)光酶免疫測定

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2018年檢驗技師免疫學檢驗重要考點：化學發(fā)光酶免疫測定：

從標記免疫測定來看，化學發(fā)光酶免疫測定(chemiluminescentenzymeimmunoasssay，CLEIA)應屬酶免疫測定。測定中2次抗原抗體反應步驟均與酶免疫測定相同，僅最后一步酶反應所用底物為發(fā)光劑，通過化學發(fā)光反應發(fā)出的光在特定的儀器上進行測定。兩種常用的標記酶，辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP)均有其發(fā)光底物，由此建立的CLEIA均在臨床檢驗中應用。

(一)HRP標記的CLEIA

常用的底物為魯米諾或其衍生物。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行，通常以0.1mol/LpH8.6Tris緩沖液作底物液，魯米諾和H2O2在無HRP催化時也能緩慢自發(fā)發(fā)光，而在最后光強度測定中造成空白干擾，因而宜分別配制成2瓶試劑溶液，只在用前即刻混合。

HRP催化魯米諾氧化的反應可被某些酚試劑(如鄰-碘酚)或螢火蟲熒光素酶等加強。加強劑的作用是增強發(fā)光和延長發(fā)光時間，由此可提高敏感度。

(二)AP標記的CLEIA

在以AP為標記酶的CLEIA中，應用的底物為adamantyldioxetasephosphate，有不少衍生物的商品試劑如PPD可供應用。