2014主管檢驗(yàn)技師考試輔導(dǎo)：抗核抗體

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　　抗核抗體(ANA)泛指抗各種核成分的抗體，是一種廣泛存在的自身抗體。ANA的性質(zhì)主要是IgG，也有IgM和IgA，甚至IgD和IgE。ANA可以與不同來源的細(xì)胞核起反應(yīng)，無器官特異性和種屬特異性。ANA主要存在于血清中，也可存在于其他體液如滑膜液、胸水和尿液中。

　　ANA在SIE患者的滴度較高，但也出現(xiàn)在其他許多自身免疫病中，在許多研究報(bào)告中，都將檢出ANA作為自身免疫甚至自身免疫病存在的依據(jù)。這種現(xiàn)象的機(jī)制尚未明了，有待于進(jìn)一步研究。

　　(一)ANA的類型及意義

　　由于細(xì)胞核成分的復(fù)雜性，不同成分的抗原性也不同;因此就會有多種不同的ANA。

　　1.抗核蛋白抗體核蛋白抗原(DNP)由DNA和組蛋白組成。由于DNP抗原存在不溶性和可溶性兩個(gè)部分，可分別產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。不溶性DNP抗體通常不完全被DNA和組蛋白所吸收，它是形成狼瘡細(xì)胞的因子;可溶性抗原存在于各種關(guān)節(jié)炎病人的滑膜液中，其相應(yīng)抗體也出現(xiàn)于RA病人的滑膜液中。

　　2.抗DNA抗體可以分為兩大類：①抗天然DNA(nDNA)抗體，或稱抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體;②抗變性DNA抗體，或稱抗單鏈DNA(ssDNA)抗體?？筪sDNA抗體對SLE有較高的特異性，70%～90%的活動期SLE病人該抗體陽性，效價(jià)較高，并與病情有關(guān)?？箂sDNA抗體可見于多種疾病中，特異性較差。

　　3.抗ENA抗體可提取性核抗原(ENA)多從動物的胸腺中提取。先將胸腺勻漿并破碎細(xì)胞，分離出細(xì)胞核;再經(jīng)鹽水或磷酸鹽緩沖液處理后，很容易從胞核中提取出來。ENA不含DNA，對核糖核酸酶敏感。近年來的研究表明，ENA可分為十幾種，現(xiàn)僅介紹幾種主要的ENA及其相應(yīng)抗體。

　　(1)抗PNP抗體：PNA即核糖核蛋白，對核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感，加熱561h變性?？筆NP抗體多見于混合性結(jié)締組織病。高效價(jià)的抗PNP抗體對混合性結(jié)締組織病有診斷意義，而低效價(jià)的抗PNP抗體可在SIE患者中發(fā)現(xiàn)。

　　(2)抗Sm抗體：該抗體在一名Smith姓的患者血中首次發(fā)現(xiàn)，便以其名字的前兩個(gè)字母命名。Sm抗原系非核酸性糖蛋白，對DNase及RNase均不敏感，但經(jīng)碘酸鹽及胰蛋白酶處理后可被水解?？筍m抗體是SLE的特異性標(biāo)志之一，但陽性率偏低，約為30%～4%;可能是SIE的一種回憶性抗體，故在非活動期亦可檢出。若將抗dsDNA和抗Sm抗體同時(shí)檢測，可提高SLE的診斷率。

　　(3)抗SS-A抗體：SS-A為干燥綜合征(SS)的A抗原，可從動物胸腺的胞漿中提取?？筍S-A抗體主要見于SS，但也可見于其他自身免疫病如SLE中。

　　(4)抗SS-B抗體：SS-B為SS的B抗原，亦可從動物胸腺或小鼠肝細(xì)胞漿中提取，可被胰蛋白酶、輕度加熱或改變?nèi)芤簆H而破壞。13%的SLE及30%的SS患者有抗SS-B抗體。

　　(5)抗組蛋白抗體(AHA)：組蛋白是一種堿性蛋白質(zhì)，含有大量的賴氨酸及精氨酸。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)組蛋白抗原可分為5個(gè)亞單位：H-1、H2A、H-2B、H-3、H-4.抗組蛋白抗體及其抗亞單位抗體見于SLE及藥物誘發(fā)的LE.SLE病人血清中的抗組蛋白亞單位抗體檢出率順序?yàn)椋嚎笻-2B、抗H-1、抗H-3、抗H-2A及抗H-4，以抗H-2B和抗H-1為主，并與SLE的活動性有關(guān)。

　　(二)ANA的檢測方法

　　由于ANA的復(fù)雜性及多樣性，故測定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴(kuò)散、對流免疫電泳及免疫印跡技術(shù)等。

　　1.免疫熒光法檢測血清總ANA最常用的方法是熒光免疫組化法。多用小鼠肝切片或印片作為細(xì)胞核基質(zhì)，結(jié)果比較穩(wěn)定可靠，在熒光顯微鏡下見到的細(xì)胞核有熒光著色為陽性反應(yīng)。如將患者血清先進(jìn)行不同比例的稀釋，可以做大致的定量試驗(yàn)，在1：80稀釋仍然雖陽性時(shí)，對SLE的診斷有較大的參考價(jià)值。在油鏡下觀察結(jié)果，可以將ANA陽性的熒光現(xiàn)象分成4種主要的熒光核型，核型的確定對臨床診斷有進(jìn)一步的參考價(jià)值。①周邊型表示抗DNA抗體存在;②均質(zhì)型表示有抗DNP抗體;③斑點(diǎn)(顆粒)型多為抗ENA抗體;④核仁型多為抗核小體抗體。SLE患者常出現(xiàn)周邊型、勻質(zhì)型或混合型，斑點(diǎn)型多見于混合結(jié)締組織病，而硬皮病多為核仁型;周邊型對SLE有較高的特異性。

　　近年有人用錐蟲或血鞭毛蟲(例如綠蠅短膜蟲試驗(yàn))作基質(zhì)測定抗dsDNA抗體，因?yàn)檫@些血寄生蟲的動基體內(nèi)含大量的純dsNDA，無其他抗原干擾;在陽性結(jié)果時(shí)，可見鞭毛一端的動基體顯示清晰的熒光。因此該試驗(yàn)用于測定抗dsDNA抗體具有特異性強(qiáng)和敏感性高的優(yōu)點(diǎn)。另外，短膜蟲對人畜無害，可以人工養(yǎng)殖，來源方便，值得推廣。

　　2.放射免疫法常用檢測抗DNA抗體，有Farr法及過濾法。①Farr法的原理為用同位素標(biāo)記DNA，被標(biāo)記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結(jié)合，經(jīng)50%硫酸銨飽和液沉淀，然后比較沉淀物和上清液中的放射活性，從而得出DNA結(jié)合活性，一般結(jié)合率大于20%為陽性。②過濾法是在分離結(jié)合物時(shí)用纖維素酯薄膜濾器(孔徑為0.45μm)進(jìn)行過濾，游離的DNA被濾去而與抗體結(jié)合的復(fù)合物被阻留在濾膜上。

　　3.ELISA臨床上主要是應(yīng)用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體，其重復(fù)性及敏感性均較對流免疫電泳及雙擴(kuò)散為高。目前已有試劑盒供應(yīng)。

　　4.免疫印跡(immunoblotting)先將混合抗原作凝膠電泳，分離開不同的區(qū)帶，然后將這些帶轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，最后用酸標(biāo)抗體或放射性同位素標(biāo)記抗體進(jìn)行檢測和分析。由于該試驗(yàn)不需純化的單個(gè)抗原，可在同一固相上作多項(xiàng)分析檢測，靈敏度高，特異性強(qiáng)。故目前已廣泛用于自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測，如檢測抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。

　　另外，還可用傳統(tǒng)的瓊脂雙向擴(kuò)散法、對流免疫電泳法、間接血凝法和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等。這些試驗(yàn)要求的實(shí)驗(yàn)條件比較低，但敏感性也比較低。

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