血紅蛋白的測(cè)定方法

　　血紅蛋白是一種色素蛋白，可以用比色法測(cè)定。血液中血紅蛋白以各種形式存在，包括氧合血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白或其他衍生物。

　　1)氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測(cè)定法：血液中除了SHb以外，其他各種血紅蛋白均可被試劑轉(zhuǎn)化、生成HiCN，其最大的吸收峰為540nm波長(zhǎng)，可經(jīng)比色測(cè)定。此法為國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì) (ICSH)推薦的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)參考方法，操作簡(jiǎn)單，顯色快且結(jié)果穩(wěn)定;但本法試劑中KCN有劇毒，測(cè)定過程中高白細(xì)胞和高球蛋白血癥易致混濁，HbCO轉(zhuǎn)化較慢。

　　2)十二烷基月桂酰硫酸鈉血紅蛋白(SLS-Hb)法：除SHb外，血液中各種Hb均可與低濃度十二烷基月桂酰硫酸鈉(SLS)作用，生成SLS-Hb棕紅色化合物。SLS-Hb最大吸收波峰538nm，波谷500nm，肩峰560nm.由于摩爾消光系數(shù)尚未最后確認(rèn)，因此不能用吸光度“A”值直接計(jì)算血紅蛋白濃度。本法操作簡(jiǎn)單，呈色穩(wěn)定，準(zhǔn)確性和精確性符合要求，且無公害。但SDS質(zhì)量差異較大，并且SDS可破壞白細(xì)胞，不適合進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)的血液分析儀使用。

　　3)疊氮高鐵血紅蛋白(HiN3)測(cè)定法：與HiCN法相似，但仍然有公害問題。

　　4)堿羥血紅蛋白(AHD 575nm)測(cè)定法：試劑簡(jiǎn)單、不含有毒試劑、呈色穩(wěn)定，但由于其吸收峰在575nm，限制了此法在血液分析儀的使用。

　　5)溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血紅蛋白測(cè)定法： 該法試劑溶血性強(qiáng)又不破壞白細(xì)胞，可同時(shí)進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，可用于血細(xì)胞分析儀自動(dòng)檢測(cè)Hb和白細(xì)胞。缺點(diǎn)是對(duì)Hb測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度較低。

　　近年來，多參數(shù)血細(xì)胞分析儀的應(yīng)用，使Hb測(cè)定逐步以儀器法取代手工法，其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、快速，同時(shí)可以獲得多項(xiàng)紅細(xì)胞的參數(shù)，血液分析儀法測(cè)定血紅蛋白的原理與手工法原理相似，多采用HiCN法，但由于各型號(hào)儀器使用的溶血?jiǎng)┎煌?，形成Hb的衍生物不同。某些溶血?jiǎng)┬纬傻难苌锓€(wěn)定性較差，因此要嚴(yán)格控制溶血?jiǎng)┘尤肓考叭苎獣r(shí)間，特別是半自動(dòng)血細(xì)胞分析儀應(yīng)嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件。有些溶血?jiǎng)﹥?nèi)雖加入了KCN，但其衍生物并非是HiCN，儀器要經(jīng)過HiCN標(biāo)準(zhǔn)液校正后，才能進(jìn)行Hb測(cè)定。儀器法測(cè)定血紅蛋白精確度CV約為1%.