臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)復(fù)習(xí)：化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型

　　化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型

　　化學(xué)發(fā)光反應(yīng)參與的免疫測(cè)定分為以下幾種類型：

　　(一)化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定

　　化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定(CLEIA)是采用化學(xué)發(fā)光劑作為酶反應(yīng)底物的酶標(biāo)記免疫測(cè)定。經(jīng)過酶和發(fā)光兩級(jí)放大，具有很高的靈敏度。以過氧化物酶為標(biāo)記酶、以魯米諾為發(fā)光底物、并加入發(fā)光增強(qiáng)劑以提高敏感度和發(fā)光穩(wěn)定性。應(yīng)用的標(biāo)記酶也可以為堿性磷酸酶，發(fā)光底物為dioxetane磷酸酯，固相載體為磁性微粒。

　　(二)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定

　　化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定(CLIA)，是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的一類免疫測(cè)定方法。吖啶酯是較為理想的發(fā)光底物，在堿性環(huán)境中即可被過氧化氫氧化而發(fā)光。

　　用作標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下幾個(gè)條件：

　　1.能參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。

　　2.與抗原或抗體偶聯(lián)后能形成穩(wěn)定的結(jié)合物試劑。

　　3.偶聯(lián)后仍保留高的量子效應(yīng)和反應(yīng)動(dòng)力。

　　4.應(yīng)不改變或極少改變被標(biāo)記物的理化特性，特別是免疫活性。

　　魯米諾類和吖啶酯類發(fā)光劑等均是常用的標(biāo)記發(fā)光劑。

　　(三)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析

　　該免疫分析技術(shù)有兩種方法：一是小分子抗原物質(zhì)的測(cè)定采用競(jìng)爭(zhēng)法;二是大分子的抗原物質(zhì)測(cè)定采用雙抗體夾心法。該儀器所用固相磁粉顆粒極微小，其直徑僅1.0μm，這樣大大增加了包被表面積，增加抗原或抗體的吸附量，使反應(yīng)速度加快，也使清洗和分離更簡(jiǎn)便。其反應(yīng)基本過程：(1)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)：用過量包被磁顆粒的抗體，與待測(cè)的抗原和定量的標(biāo)記吖啶酯抗原同時(shí)加入反應(yīng)杯溫育，其免疫反應(yīng)的結(jié)合形式有兩種，一是標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合成復(fù)合物;二是測(cè)定抗原與抗體的結(jié)合形式。(2)雙抗體夾心法：標(biāo)記抗體與被測(cè)抗原同時(shí)與包被抗體結(jié)合成一種反應(yīng)形式，即包被抗體-測(cè)定抗原-發(fā)光抗體的復(fù)合物。

　　(四)電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定

　　電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定(ECLI)是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性發(fā)光反應(yīng)，包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)部分。分析中應(yīng)用的標(biāo)記物為電化學(xué)發(fā)光的底物三聯(lián)吡啶釕或其衍生N-羥基琥珀酰胺(NHS)酯，可通過化學(xué)反應(yīng)與抗體或不同化學(xué)結(jié)構(gòu)抗原分子結(jié)合，制成標(biāo)記的抗體或抗原。ECLL的測(cè)定模式與ELISA相似。其基本原理是發(fā)光底物二價(jià)的三聯(lián)吡啶釘及反應(yīng)參與物三丙胺在電極表面失去電子而被氧化。氧化的三丙胺失去一個(gè)H+而成為強(qiáng)還原劑，將氧化型的三價(jià)釕還原為激發(fā)態(tài)的二價(jià)釕，隨即釋放光子而恢復(fù)為基態(tài)的發(fā)光底物。這一過程在電極表面周而復(fù)始地進(jìn)行，不斷地發(fā)出光子而常保持底物濃度的恒定。