2013年初級檢驗技師免疫檢驗:過碘酸鹽氧化法介紹
更新時間:2012-07-20 10:00:58
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本法只用于HRP的交聯(lián)。該酶含18%碳水化合物,過碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用硼氫化鈉(NaBH4)中和多余的過碘酸。酶上的醛根很活潑,可與蛋白質結合,形成按摩爾比例結合的酶標結合物。有人認為此法為辣根過氧化物酶交聯(lián)最有效的方法。但也有只認為由于所用試劑較為劇烈,各批實驗結果不易重復。
按以上方法制備的結合物一般混有未結合的酶和抗體。理論上結合物中混有游離酶不影響ELISA中最后的酶活性測定,因經過洗滌,非特異性吸附于固相上的游離酶已被洗去。但游離的抗體則會與酶標抗體競爭相應的固相抗原,因而減低結合到固相上的酶標抗體量。因此制備的結合物應予以純化。純化的方法較多,分離大分子混合物的方法均可應用。硫酸銨鹽析法操作簡便,但效果不如用sephadexg-200凝膠過濾的好。
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