2012檢驗(yàn)主管技師血液檢驗(yàn)：凝血因子的檢測

　　凝血因子的檢測現(xiàn)在可以實(shí)現(xiàn)的有血漿纖維蛋白原(FIB)含量測定、血漿因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性測定、血漿因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ的促凝活性測定、血漿因子ⅩⅢ定性試驗(yàn)和血漿因子ⅩⅢ亞基抗原測定。

　　1.血漿纖維蛋白原(FIB)含量測定

　　(1)原理：FIB檢測有凝血酶凝固法(Clauss法)、比濁法(PT衍生法)以及免疫學(xué)方法等。Clauss法：以凝血酶作用于待測血漿中的FIB，使其轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，血漿凝固。血漿中FIB的含量與凝固時(shí)間成負(fù)相關(guān)，檢測結(jié)果與參比血漿制成的標(biāo)準(zhǔn)曲線對比可得出纖維蛋白原的含量。PT衍生法：當(dāng)PT測定完成時(shí)，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，其形成的濁度與FIB的含量成正比，因此無需另加任何試劑，即可由產(chǎn)生的濁度，用終點(diǎn)法或速率法算出FIB含量。免疫學(xué)方法是利用抗FIB多克隆抗體與FIB特異性結(jié)合反應(yīng)進(jìn)行測定。方法有免疫濁度、單向免疫擴(kuò)散和ELISA等。

　　(2)參考范圍：2～4g/L。

　　(3)臨床意義：增高見于糖尿病、急性心肌梗死、急性傳染病、結(jié)締組織病、急性腎炎、多發(fā)性骨髓瘤、休克、大手術(shù)后、妊高征、急性感染、惡性腫瘤和應(yīng)急狀態(tài)等。降低：先天性低或無FIB血癥、遺傳性FIB異常、DIC、原發(fā)性纖溶癥、重癥肝炎和肝硬化等。

　　(4)方法學(xué)評價(jià)：Clauss法和PT衍生法：測定的是纖維蛋白原的功能，由于FIB的異質(zhì)性，當(dāng)FDP增高時(shí)，Clauss法測定結(jié)果會受到影響;免疫學(xué)方法測定的是纖維蛋白原的含量，但此法特異性不強(qiáng)，因?yàn)檫@些方法所針對的抗原決定簇也存在于纖維蛋白單體、FDPs和異常FIB中。

　　2.血漿因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性測定

　　(1)原理：一期法：將待測血漿分別與乏FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ基質(zhì)血漿混合，進(jìn)行APTT測定。將正常人混合血漿與乏因子血漿混合，測定APTT，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。從各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線中分別計(jì)算出受檢血漿中FⅧ：C、FⅨ：C、FⅪ：C和FⅫ：C相當(dāng)于正常人的百分率(%)。

　　(2)參考值：FⅧ：C 103%±25.7%;FⅨ：C 98.1%士30.4%;FⅪ：C 100%士18.4%;FⅫ：C 92.4%士20.7%。

　　(3)臨床意義

　　1)增高：主要見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病，如靜脈血栓形成、肺栓塞、妊高征、晚期妊娠、口服避孕藥、腎病綜合征、惡性腫瘤等。

　　2)減低：FⅧ：C減低見于血友病A、血管性血友病、血中存在因子Ⅷ抗體、DIC;FⅨ：C減低見于血友病B、肝臟病、維生素K缺乏癥、DIC、口服抗凝藥物;FⅪ：C減低見于因子Ⅺ缺乏癥、肝臟疾病、DIC等;FⅫ：C減低見于先天性因子Ⅻ缺乏癥、肝臟疾病、DIC和某些血栓性疾病等。

　　(4)注意事項(xiàng)

　　1)FⅧ：C在急性時(shí)相反應(yīng)時(shí)可明顯升高，在嚴(yán)重肝實(shí)質(zhì)損傷時(shí)，F(xiàn)Ⅷ：C可明顯升高。FⅧ：C減低時(shí)，需與vWF含量同時(shí)測定，以篩選出vWF缺陷的可能。

　　2)目前認(rèn)為，凝血因子促凝活性測定不必等待逐級篩選和糾正試驗(yàn)的結(jié)果，可以在單純APTT延長時(shí)檢測。

　　3)受檢標(biāo)本檢測凝固時(shí)間不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍可稀釋后檢測。

　　3.血漿因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ的促凝活性測定

　　(1)原理：將待測血漿分別與乏FⅡ、FⅤ、FⅦ和FⅩ基質(zhì)血漿混合，進(jìn)行PT測定。將正常人混合血漿與乏因子血漿混合，測定PT，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。從各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線中分別計(jì)算出受檢血漿中FⅡ：C、FⅤ：C、FⅦ：C和FⅩ：C相當(dāng)于正常人的百分率(%)。

　　(2)參考值：FⅡ：C：97.7%±16.7%;FⅤ：C：102.4%±30.9%;FⅦ：C：100%±l7.3%;和FⅩ：C：103%±l9. 0% 。

　　(3)臨床意義

　　1)增高：見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病。

　　2)減低：見于維生素K缺乏癥(FⅤ除外)、肝臟疾病、DIC、口服抗凝劑和血中存在相應(yīng)的抑制物，先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ缺乏癥較罕見。目前因子FⅡ：C、FⅤ：C、FⅦ：C和FⅩ：C的測定主要用于肝臟受損的檢查，因子Ⅶ：C在肝臟早期可下降，因子Ⅴ的測定在肝損傷和肝移植中應(yīng)用較多。

　　4.血漿因子ⅩⅢ定性試驗(yàn)

　　(1)原理：在鈣離子作用下，因子ⅩⅢ能使溶解于尿素溶液的可溶性纖維蛋白單體聚合物變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白。因此，含因子ⅩⅢ的血漿鈣化凝固后不再溶于尿素溶液中，而缺乏ⅩⅢ的血漿則聚合物可溶于5mol/L尿素溶液中。

　　(2)參考范圍：24h內(nèi)纖維蛋白凝塊不溶解。

　　(3)臨床意義：本試驗(yàn)簡單、可靠，是十分有用的過篩試驗(yàn)。在臨床上若發(fā)現(xiàn)傷口愈合緩慢、滲血不斷或懷疑有因子ⅩⅢ缺陷者，可首選本試驗(yàn)。若纖維蛋白在24h內(nèi)，尤其是2h內(nèi)完全溶解，表示因子ⅩⅢ缺乏，見于先天性因子ⅩⅢ缺乏或獲得性因子ⅩⅢ缺乏，后者見于肝臟疾病、SLE、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、惡性淋巴瘤、轉(zhuǎn)移性肝癌、DIC、原發(fā)性纖溶等。

　　5.血漿因子ⅩⅢ亞基抗原測定

　　(1)原理：凝血因子ⅩⅢ由兩個(gè)亞基α和β構(gòu)成。檢測方法―免疫火箭電泳法：在含有FⅩⅢα亞基和β亞基抗血清的瓊脂凝膠板中，加入受檢血漿(抗原)，在電場作用下，出現(xiàn)抗原-抗體反應(yīng)形成的火箭樣沉淀峰，此峰的高度與受檢血漿中FⅩⅢ亞基的濃度成正比。根據(jù)沉淀峰的高度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出FⅩⅢα：Ag和FⅩⅢβ：Ag相當(dāng)于正常人的百分率。

　　(2)參考范圍：FⅩⅢα：Ag 100.4±12.9%，F(xiàn)ⅩⅢβ：Ag 98.8±12.5%。

　　(3)臨床意義：同上。

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