2012年初級檢驗技士免疫檢驗:速率散射比濁分析簡介
(一)基本原理
速率散射比濁分析是一種動力學(xué)測定方法,在一定條件下,抗原和相應(yīng)的抗體很快結(jié)合成抗原抗體免疫復(fù)合物顆粒,速率比濁法就是在一定時間內(nèi)抗原抗體結(jié)合過程中,測定二者結(jié)合的最大反應(yīng)速度,即反應(yīng)達(dá)頂峰峰值。所謂速率是抗原抗體結(jié)合反應(yīng)過程中,在單位時間內(nèi)兩者結(jié)合的速度。速率法是測定最大反應(yīng)速率,即在抗原抗體反應(yīng)達(dá)最高峰時,通常為數(shù)十秒鐘,測定其復(fù)合物形成的量。峰值的高低在抗體過量情況下與抗原的量成正比。峰值出現(xiàn)的時間與抗體的濃度及其親和力直接相關(guān)。不同抗原含量其速率峰值不同,通過電腦處理,求出抗原含量。
(二)抗原過量檢測
真正的抗原過量檢測是為保證速率散射比濁分析檢測的準(zhǔn)確性和精確度,在Beckman公司的生產(chǎn)的ARRY360系統(tǒng)中,設(shè)計有抗原過量檢測系統(tǒng)。其原理是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)形成的濁度不斷增加而設(shè)計的。在抗體固定的情況下,免疫復(fù)合物的生成量隨抗原的增加而增加,當(dāng)抗原量超過抗體量時,免疫復(fù)合物的量反而減少。根據(jù)這一原理,當(dāng)標(biāo)本中的抗原和反應(yīng)液中的抗體結(jié)合后,若反應(yīng)液中有未結(jié)合的抗體存在,再加入抗原時,可見新的速率峰值信號。如果沒有游離的抗體存在,即抗原過剩的情況下,就不會有或者只有很小的新的速率信號出現(xiàn),儀器會重新對標(biāo)本進行更高稀釋(1:6、1:36、1:216及1:1296等),然后進行測定,使結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
附:終點散射比濁法
其原理是讓抗原抗體作用一定時間,使其反應(yīng)達(dá)到平衡后,測定其復(fù)合物的量。復(fù)合物的濁度不再受時間的影響,但反應(yīng)復(fù)合物聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前(大約反應(yīng)數(shù)十分鐘)進行濁度測定。敏感度達(dá)mg/L水平,可自動化,但反應(yīng)時間較長。
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