2012檢驗(yàn)主管技師血液檢驗(yàn)：紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗(yàn)及其應(yīng)用

　　1.高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)

　　(1)原理：在血液中加入亞硝酸鹽使紅細(xì)胞中的亞鐵血紅蛋白變成高鐵血紅蛋白，正常紅細(xì)胞的G-6-PD催化戊糖旁路使NADP(氧化型輔酶Ⅱ)變成NADPH(還原型輔酶Ⅱ)，其脫的氫通過(guò)亞甲藍(lán)試劑的遞氫作用而使高鐵血紅蛋白(Fe3+)還原成亞鐵血紅蛋白(Fe2+)，通過(guò)比色可觀察還原的多少。當(dāng)G-6-PD缺乏時(shí)，高鐵血紅蛋白還原率下降。

　　參考值 正常人高鐵血紅蛋白還原率大于75%(臍帶血≥77%)。

　　(2)臨床意義：G-6-PD缺乏時(shí)，高鐵血紅蛋白還原率下降。中間缺乏(雜合子)為31%～74%，嚴(yán)重缺乏(半合子或純合子)小于30%。

　　2.變性珠蛋白小體檢查

　　(1)原理：G-6-PD缺乏的病人血樣加入乙酰苯肼于37℃孵育2～4小時(shí)，用煌焦油藍(lán)染色觀察紅細(xì)胞中珠蛋白小體的生成情況，計(jì)算含5個(gè)及以上珠蛋白小體的紅細(xì)胞的百分率。

　　參考值 正常人含5個(gè)及以上珠蛋白小體的紅細(xì)胞一般小于30%。

　　(2)臨床意義：G-6-PD缺乏癥常高于45%，故可作為G-6-PD缺乏的篩檢試驗(yàn)。但還原型谷胱甘肽缺乏癥也增高;不穩(wěn)定血紅蛋白病含小體的細(xì)胞百分率為75%～84%，HbH病和化學(xué)物質(zhì)中毒時(shí)也增高。

　　3.G-6-PD測(cè)定：包括熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和G-6-PD活性檢測(cè)。

　　(1)原理：在G-6-PD和NADP+存在下，G-6-PD能使NADP+還原成NADPH，后者在紫外線(xiàn)照射下會(huì)發(fā)出熒光。NADPH的吸收峰在波長(zhǎng)340nm處，可通過(guò)單位時(shí)間生成的NADPH的量來(lái)測(cè)定G-6-PD活性。

　　參考值 正常人有很強(qiáng)熒光。正常人酶活性為(4.97±1.43)U/gHb。

　　(2)臨床意義：G-6-PD缺陷者熒光很弱或無(wú)熒光;雜合子或某些G-6-PD變異者則可能有輕到中度熒光。G-6-PD缺乏者酶活性減少。

　　4.丙酮酸激酶測(cè)定：包括熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和PK活性檢測(cè)。

　　(1)原理：在二磷酸腺昔(ADP)存在的條件下丙酮酸激酶(PK)催化磷酸烯醇丙酮酸(PEP)轉(zhuǎn)化成丙酮酸，在輔酶Ⅰ還原型(NADH)存在情況下，丙酮酸被LDH轉(zhuǎn)化為乳酸，若標(biāo)記熒光于NADH上，此時(shí)有熒光的NADH變?yōu)闊o(wú)熒光的NAD。

　　參考值 正常熒光在20min內(nèi)消失。15.0±1.99IU/gHb(37℃)(ICSH推薦Blume法)

　　(2)臨床意義：PK嚴(yán)重缺乏者熒光60min不消失;PK中等缺乏者熒光25～60min消失。純合子PK值在正?；钚缘?5%以下，雜合子為正常25%～50%。

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