初級檢驗技師輔導(dǎo)：糞便檢查免疫學(xué)方法
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初級檢驗技師輔導(dǎo)：糞便檢查免疫學(xué)方法 $lesson$
免疫學(xué)方法
為解決隱血試驗的特異性問題及鑒別消化道出血部位，當前發(fā)展的最快的是免疫學(xué)方法，如免疫單擴法、對流免疫電泳、酶聯(lián)免疫吸附試驗、免疫斑點法、膠乳免疫化學(xué)凝聚法，放射免疫擴散法、反向間接血凝法、膠體金標記夾心免疫檢驗法等，此類試驗所用抗體分為兩大類，一種為抗人血紅蛋白抗體，加一種抗人紅細胞基質(zhì)抗體。免疫學(xué)方法具有很好的靈敏度，一般血紅蛋白為0.2mg/L,0.03mg/g糞便就可得到陽性結(jié)果，且有很高的特異性，各種動物血血紅蛋白在500mg/L，辣根過氧化物酶在2000mg/L時不會出現(xiàn)干擾，因而不需控制飲食，據(jù)Herzog和Cameron等研究，正常人24小時胃腸道生理性失血量為0.6ml，若每日多于2ml，則屬于病理性出血。由于免疫學(xué)方法的高度敏感性，又由于有正常的生理性失血，如此高的靈敏度，要在某些正常人特別是服用刺激備用腸道藥物后可造成假陽性。但免疫學(xué)隱血試驗主要檢測下消化道的優(yōu)點，目前被認為是對大腸癌普查最適用的試驗，免疫學(xué)法隱血試驗主要檢測下消化道出血，約有40-50%的上消化道出血不能檢出。原因是：①血紅蛋白或紅細胞經(jīng)過消化酶降解已不具有原來免疫原性;②過量大出血而致反應(yīng)體系中抗原過剩出現(xiàn)前帶現(xiàn)象;③病人血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不配，因此有時外觀為柏油樣便而免疫法檢查卻呈陰性或弱陽性，此時需將原已稀釋的糞便再稀釋50-100倍重做或用化學(xué)法復(fù)檢。此外免疫學(xué)的方法也從檢測血紅蛋白與人紅細胞基質(zhì)擴展到測定糞便中其它隨出血而出現(xiàn)的帶有良好的抗原性而又不易迅速降解的蛋白質(zhì)、如白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等，靈敏度達2mg/L。
[方法與結(jié)果] 常用化學(xué)方法有鄰甲苯胺法、聯(lián)苯胺法、匹拉米洞法、無色孔雀綠法、愈創(chuàng)木法等。鄰聯(lián)甲苯胺法靈敏度高，可檢出消化道1～5ml的出血;聯(lián)苯胺法、匹拉米洞法、無色孔雀綠法中度靈敏，可檢出5～10ml的出血;愈創(chuàng)木法靈敏度差，出血達20ml時方出現(xiàn)陽性。正常人糞便隱血試驗呈陰性反應(yīng)。
[臨床意義] 便隱血試驗對消化道出血有重要診斷價值。
(1) 陽性反應(yīng):
①消化性潰瘍，陽性率為40%一70%，呈間隙陽性;
②消化道惡性腫瘤，如胃癌、結(jié)腸癌，陽性率可達95%，呈持續(xù)性陽性，因此，OBT常作為消化道惡性腫瘤的診斷篩選指標;
③其他，如急性胃粘膜病變、腸結(jié)核、Crohn病、潰瘍性結(jié)腸炎、鉤蟲病及流行性出血熱等，OBT均常為陽性。
(2)假陽性反應(yīng): 進食動物血、肉類及進食大量蔬菜均可出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，因此在進行OBT前要求素食3天。近年來為解決OBT特異性問題和鑒別消化道出血部位建立了一些免疫學(xué)檢查法，所用抗體有兩種，一種為抗人血紅蛋白抗體，另一種為抗人紅細胞基質(zhì)抗體，后者可檢出下消化道出血，因上消化道出血時的紅細胞或血紅蛋白經(jīng)消化酶降解變性己失去原來的免疫原性。免疫法隱血試驗特異性高，不受動物血紅蛋白干擾，因而不需控制飲食。
課堂練習(xí)：
臨床判斷消化道出血完全停止的最可靠實驗指標結(jié)果是： C
A、糞鏡檢無紅細胞 B、無柏油樣黑便 C、糞隱血試驗陰性 D、糞膽素試驗陰性 E、糞膽原試驗陰性