初級(jí)中藥師輔導(dǎo):黃酮類化合物的分離
初級(jí)中藥師輔導(dǎo):黃酮類化合物的分離
分離的基本依據(jù):
極性差異、酸性強(qiáng)弱、分子大小和特殊結(jié)構(gòu)。
1、溶劑萃取法
2、PH梯度法:用不同濃度的堿分離
3、柱色譜法
(1)硅膠柱色譜法
適于分離異黃酮,二氫黃酮(醇)和高度甲基化或乙酰化的黃酮及黃酮醇類。
分離苷元時(shí):氯仿-甲醇混合溶劑洗脫。
分離苷時(shí):氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水
(2)聚酰胺柱色譜
適于黃酮類化合物的分離。
原理:氫鍵吸附學(xué)說(shuō),即聚酰胺的吸附作用是通過(guò)其酰胺羰基與黃酮類化合物上的酚羥基形成氫鍵締合而產(chǎn)生的,其吸附強(qiáng)度取決于黃酮類化合物分子中酚羥基的數(shù)目與位置等及溶劑于黃酮類化合物或與聚酰胺之間形成氫鍵?合能力的大小。
規(guī)律:
A:與酚羥基的數(shù)目有關(guān),數(shù)目越多,吸附力越強(qiáng)。如:桑色素的吸附力強(qiáng)于山奈酚
B:與酚羥基的位置有關(guān),如果酚羥基所處的位置易形成分子內(nèi)氫鍵,則吸附力減弱。如:大豆素的吸附力強(qiáng)于卡來(lái)可新
C:分子內(nèi)芳香化程度越高,共軛雙鍵越多,則吸附力越強(qiáng)。查耳酮吸附力強(qiáng)于二氫黃酮
D:不同類型黃酮類化合物,被吸附的強(qiáng)弱順序?yàn)椋狐S酮醇>黃酮>二氫黃酮醇>異黃酮。
E、苷元相同時(shí),以含水移動(dòng)相洗脫,被吸附的強(qiáng)弱順序?yàn)椋?苷元>單糖苷>雙糖苷>?糖苷。如果以有機(jī)溶劑作洗脫劑,結(jié)果則相反。
F:洗脫溶劑的影響:洗脫能力由弱到強(qiáng)的順序?yàn)椋?/p>
水-甲醇或乙醇(濃度由低到高)-丙酮-稀氫氧化鈉水溶液或氨水-甲酰胺-二甲基甲酰胺-尿素水溶液
(3)葡聚糖凝膠色譜法
凝膠類型:Ssephadex LH-20和Sephadex G兩種類型的凝膠。
分離苷元時(shí):利用吸附作用,游離酚羥基數(shù)目越多,則吸附力越強(qiáng),越難洗脫。
分離苷時(shí):主要靠分子篩,洗脫時(shí)按苷分子量由大到小的順序依次被洗脫出柱體。
常用的洗脫劑:堿性水溶液,含鹽水溶液、醇及含水醇
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