初級檢驗技士輔導(dǎo)：細(xì)菌的代謝試驗

　　初級檢驗技士輔導(dǎo)：細(xì)菌的代謝試驗

　　細(xì)菌對于蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝原理為：不同種類的細(xì)菌分解蛋白質(zhì)的能力不同。細(xì)菌對蛋白質(zhì)的分解，一般先由胞外酶將復(fù)雜的蛋白質(zhì)分解為短肽(或氨基酸)，滲入菌體內(nèi)，然后再由胞內(nèi)酶將肽類分解為氨基酸。具體試驗方法有：①明膠液化試驗;②吲哚試驗(靛基質(zhì)試驗);③硫化氫試驗;④尿素酶試驗;⑤苯丙氨酸脫氨酶試驗;⑥氨基酸脫羧酶試驗。

　　1.明膠液化試驗

　　(1)原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生一種胞外酶-明膠酶，能使明膠分解為氨基酸，從而失去凝固力，半固體的明膠培養(yǎng)基成為流動的液體。

　　(2)方法：將被檢菌穿刺接種于明膠培養(yǎng)基，于22℃培養(yǎng)7d，逐日觀察結(jié)果。若用35℃孵育，因明膠在此溫度下自行液化，故在觀察結(jié)果前，先置4℃冰箱內(nèi)30min，再看結(jié)果。

　　(3)結(jié)果：培養(yǎng)基呈液化狀態(tài)為陽性。

　　(4)應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌的鑒別，如沙雷菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、陰溝桿菌等可液化明膠，而其他細(xì)菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。另外多數(shù)假單胞菌也能液化明膠。

　　2.吲哚(靛基質(zhì))試驗

　　(1)原理：某些細(xì)菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚(靛基質(zhì))，當(dāng)加入吲哚試劑(對位二甲氨基苯甲醛)后則形成紅色的玫瑰吲哚。

　　(2)培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基。

　　(3)方法：將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中，于35℃培養(yǎng)24～48h，沿試管壁慢慢加入吲哚試劑。

　　(4)結(jié)果：于兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽性，無色為陰性。

　　(5)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。

　　3.硫化氫試驗

　　(1)原理：某些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸(如胱氨酸、半胱氨酸)產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇鉛或亞鐵離子則形成黑褐色的硫化鉛或硫化鐵沉淀。此試驗可間接檢測細(xì)菌是否產(chǎn)生硫化氫。

　　(2)培養(yǎng)基：醋酸鉛培養(yǎng)基。

　　(3)方法：將待檢菌穿刺接種于醋酸鉛培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)24～48h觀察結(jié)果。

　　(4)結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不變?yōu)殛幮浴?/p>

　　(5)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中屬及種的鑒別。如沙門菌屬、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬細(xì)菌，絕大多數(shù)硫化氫陽性，其他菌屬陰性。沙門菌屬中也有硫化氫陰性菌種。

　　4.尿素分解試驗

　　(1)原理：某些細(xì)菌具有尿素分解酶，能分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基呈堿性。

　　(2)培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基。

　　(3)方法：將待檢菌接種于尿素培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。

　　(4)結(jié)果：培養(yǎng)基呈堿性，使酚紅指示劑變紅為陽性，不變?yōu)殛幮浴?/p>

　　(5)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細(xì)菌的鑒定。奇異變形桿菌和普通變形桿菌脲酶陽性。另外雷氏普羅威登菌和摩根菌為陽性，而斯氏和產(chǎn)堿普羅威登菌陰性。

　　5.苯丙氨酸脫氨酶試驗

　　(1)原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙酮酸，加入氯化鐵試劑后產(chǎn)生綠色反應(yīng)。

　　(2)培養(yǎng)基：苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基。

　　(3)方法：將被檢菌濃厚接種于苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基斜面上，于35℃培養(yǎng)18～24h，滴加10%三氯化鐵試劑3～4滴，自斜面上方流下。

　　(4)結(jié)果：出現(xiàn)綠色為陽性。應(yīng)立即觀察結(jié)果，延長反應(yīng)時問會引起褪色。

　　(5)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬和摩根菌屬細(xì)菌均為陽性，腸桿菌種中其他細(xì)菌均為陰性。

　　6.氨基酸脫羧酶試驗

　　(1)原理：具有氨基酸脫羧酶的細(xì)菌，能分解氨基酸使其脫羧生成胺(賴氨酸→尸胺，鳥氨酸→腐胺，精氨酸→精胺)和二氧化碳，使培養(yǎng)基變堿。使指示劑顯示出來。

　　(2)培養(yǎng)基：氨基酸脫羧酶培養(yǎng)基和氨基酸對照培養(yǎng)基。

　　(3)方法：將被檢菌分別接種于賴氨酸(或鳥氨酸或精氨酸)培養(yǎng)基和氨基酸對照培養(yǎng)基中，并加入無菌液體石蠟或礦物油，于35℃培養(yǎng)l～4d，每日觀察結(jié)果。

　　(4)結(jié)果：對照管應(yīng)呈黃色，測定管呈紫色(指示劑為溴甲酚紫)為陽性，若測定管呈黃色為陰性。若對照管呈現(xiàn)紫色則試驗無意義，不能作出判斷。

　　(5)應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。如沙門菌屬中除傷寒和雞沙門菌外，其余沙門菌的賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶均為陽性。志賀菌屬除宋內(nèi)和鮑氏志賀菌外，其他志賀菌均為陰性。

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