初級檢驗(yàn)技師考試輔導(dǎo)：免疫細(xì)胞的分離

　　初級檢驗(yàn)技師考試輔導(dǎo)：免疫細(xì)胞的分離

　　免疫細(xì)胞的分離

　　(1)外周血單個核細(xì)胞的分離

　　外周血中單個核細(xì)胞(淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞)的比重與紅細(xì)胞、多核白細(xì)胞及血小板不同，介于1.075～1.090之間，因而可利用一種比重介于1.075～1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心，使一定比重的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布而加以分離。常用的分層液有Ficoll與Percoll兩種。

　　(2)淋巴細(xì)胞的分離

　　1)純淋巴細(xì)胞群的采集：利用單核細(xì)胞在37℃和Ca2+存在時，能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，從單個核細(xì)胞懸液中除去單核細(xì)胞，從而獲得純淋巴細(xì)胞群。主要的方法有：①粘附貼壁法;②吸附柱過濾法;③磁鐵吸引法。

　　2)淋巴細(xì)胞亞群的分離原則：選擇純化所需細(xì)胞的方法是陽性選擇法，而選擇性去除不要的細(xì)胞，僅留下所需的細(xì)胞為陰性選擇法。常用的方法包括：①E花環(huán)沉降法;②尼龍毛柱分離法;③親和板結(jié)合分離法;④磁性微球分離法及熒光激活細(xì)胞分離儀分離法。

　　(3)淋巴細(xì)胞的保存與活力測定

　?、俣唐诒４婕夹g(shù)：短期保存可置于4℃保存。

　?、陂L期保存技術(shù)：液氮深低溫(-196℃)環(huán)境保存細(xì)胞，加入二甲亞砜作為保護(hù)劑。

　?、刍盍y定：最簡便常用的為臺盼藍(lán)染色法，呈藍(lán)色。

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