初級(jí)檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：雜交瘤技術(shù)基本原理

　　初級(jí)檢驗(yàn)技師輔導(dǎo)：雜交瘤技術(shù)基本原理

　　雜交瘤技術(shù)基本原理

　　(1)基本原理：是通過(guò)融合兩種細(xì)胞而同時(shí)保持兩者的主要特征。這兩種細(xì)胞分別是經(jīng)抗原免疫的小鼠脾細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞。在選擇培養(yǎng)基的作用下，只有B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的雜交細(xì)胞才具有持續(xù)培養(yǎng)的能力，形成同時(shí)具備抗體分泌功能和保持細(xì)胞永生性兩種特征的細(xì)胞克隆。

　　(2)B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)

　�、偌�(xì)胞的選擇和融合：雜交瘤技術(shù)的目的是制備對(duì)抗原特異性的單克隆抗體，多發(fā)性骨髓瘤是B細(xì)胞系惡性腫瘤，是理想的脾細(xì)胞融合對(duì)象。

　�、谶x擇培養(yǎng)基的關(guān)鍵成分次黃嘌呤(H)、氨甲蝶呤(A)、胸腺嘧啶核苷(T)，取三者字頭稱HAT培養(yǎng)基。

　�、塾邢尴♂屌c抗原特異性的選擇：將融合細(xì)胞進(jìn)行充分稀釋，進(jìn)行克隆化處理，再將陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行再次克隆化，應(yīng)用特異性抗原包被的ELISA找出針對(duì)目標(biāo)抗原的抗體陽(yáng)性細(xì)胞株進(jìn)行增殖，再進(jìn)行冰凍，體外培養(yǎng)或動(dòng)物腹腔接種。

　　(3)T細(xì)胞雜交瘤：可分為小鼠細(xì)胞雜交瘤和人T細(xì)胞雜交瘤。是將激活的細(xì)胞與酶缺陷型淋巴瘤細(xì)胞融合，通過(guò)有限克隆稀釋，獲得特異性表達(dá)細(xì)胞受體(TCR)或其他功能的雜交瘤細(xì)胞。其步驟①淋巴瘤細(xì)胞系的選擇;②特異性細(xì)胞的制備與活化;③T細(xì)胞雜交瘤的篩選。

　　(4)陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)：將陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞分離培養(yǎng)，產(chǎn)生單克隆雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)2～3次檢測(cè)均為陽(yáng)性的雜交瘤單個(gè)細(xì)胞，才能進(jìn)行克隆化培養(yǎng)。陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞應(yīng)保存在-196℃。

• 2011年衛(wèi)生職稱考試輔導(dǎo)招生專題 
• 2011年檢驗(yàn)職稱考試時(shí)間
• 2011年檢驗(yàn)專業(yè)百套試題免費(fèi)測(cè)試
• 2009衛(wèi)生資格考試通過(guò)率達(dá)92.8%

更多信息訪問(wèn)：初級(jí)檢驗(yàn)技師試頻道 初級(jí)檢驗(yàn)技師考試論壇 醫(yī)衛(wèi)博客圈