2015主管藥師考試輔導(dǎo)：乳糜微粒檢查試劑

　　乳糜微粒檢查試劑是主管藥師考試所涉及的內(nèi)容，環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)整理如下，供廣大主管藥師考試考生參考學(xué)習(xí)。

　　(1)免疫透射比濁法：

　　①樣品稀釋劑：pH 7.4的磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L磷酸鹽中含0.15mol/L氯化鈉)，內(nèi)含PEG-6000 40g/L及表面活性劑適量(選用聚氧乙烯月桂醚類，如Thesit或Tween-20)，用GS玻芯漏斗抽濾后用。本試劑的吸光度A340nm<0.05，在2～6℃冰箱中可存放半年。如半年后A值仍<0.05，可繼續(xù)應(yīng)用，如>0.05可按上述條件抽濾后再用。

　?、谘蚧蛲每谷薬poAⅠ抗血清：原血清效價以1∶32～1∶64為宜。抗血清可用含PEG-6000的磷酸鹽緩沖液(不含表面活性劑)或用硫酸銨沉淀法純化。抗血清應(yīng)用液濃度因各批抗血清的效價及免疫親和力而異(應(yīng)按試劑盒說明書，臨用前稀釋)?？寡逯泻栏瘎?～6℃冰箱中可存放半年。原血清(凍干)在低溫冰箱中(-20℃以下)可貯存數(shù)年。

　　③參考血清：現(xiàn)在已有國際標準，即WHO CM參考物質(zhì)SPI-01(凍干血清)。符合國際標準的校準血清由衛(wèi)生部北京老年醫(yī)學(xué)研究所提供。

　　校準血清保存在-20℃以下，至少穩(wěn)定半年，化凍后必須徹底混勻后才能應(yīng)用。最好備有高、中、低濃度(例如apoAⅠ 2.0，1.3與0.6g/L左右)的校準血清各1份。便于作校準曲線。

　　附注：

　?、訇P(guān)于抗血清：比濁測定與其他方法相比對抗血清的要求更高。比濁法以用多克隆抗體為宜。抗血清中必須不含雜抗體。必須十分重視從人血清中提取的apoA-Ⅰ達到免疫純、色譜純與電泳純，這不是一般實驗室都能做到的?？寡逍r(滴度)不可低于16.目前國內(nèi)某些商品試劑中，apoA-Ⅰ抗血清效價極低，選購試劑盒時必須注意。如果沒有在選購前鑒定抗血清質(zhì)量的經(jīng)驗，應(yīng)請有條件的單位鑒定之。

　?、谏戏ㄖ袠吮?血清)稀釋200倍是為了便于手工操作(加樣100μl)，如有精密加樣器，可作20倍稀釋(用10μl)。為了適合不同實驗室的條件(如不同類型的自動化儀器)，作適當修改時應(yīng)注意抗原抗體的比例，必須十分注意反應(yīng)體系中不可有抗原過量，線性上限不可低于2.5g/L.換言之，抗血清用量必須充裕，否則標本中apoA-Ⅰ高水平時測出結(jié)果偏低。目前國內(nèi)某些商品試劑盒不但抗血清效價過低，操作中所定標本用量又過大(如3～5μl)，抗體明顯不足，測出結(jié)果必然不準確。

　?、蹫榱诉_到準確測定的目的，apoA-Ⅰ與B比濁測定(終點法)中必須作校準曲線計算結(jié)果。一定范圍(低標本用量)濃度(X)與濁度(Y)基本上成直線關(guān)系，直線回歸計算出在Y軸上有一定截距(A值<0.1)，所以用單點校準計算結(jié)果偏差較大，使測出結(jié)果不能準確反映濃度的高低(高的偏低，低的偏高)。千萬不要因為單點法簡便而忽略了測定的準確性。無論用何種自動化儀器，必須先試作校準曲線。如果在所用儀器及特定條件下反復(fù)測試，回歸線的截距不明顯時，才能采用單點校準法。標本用量在3～5μl時，即使加大抗血清用量，濃度與濁度也不成直線關(guān)系，只能用曲線直線化轉(zhuǎn)換后計算。

　?、苤饕蓴_因素是血清本身的混濁(如高脂血清)，用超離心或脂肪酶水解等標本預(yù)處理方法都不實用。用表面活性劑消濁的作用也有限，所以在測定中必須作標本空白管。除了自動分析中可采用兩點法外，手工法用單一試劑而不扣除標本空白的做法是錯誤的。為了減少基質(zhì)效應(yīng)對濁度反應(yīng)的影響，必須用定值血清作校準物。此外，塵埃粒子、比濁皿劃痕等干擾也必須排除。

　?、萦械纳唐吩噭┖?包括某些進口產(chǎn)品)所附校準血清定值不準確，是誤差的重要來源。

　　(2)火箭電泳法：

　　①巴比妥緩沖液，離子強度0.05，pH8.6.

　?、?0g/L瓊脂糖(標準電內(nèi)滲)用巴比妥緩沖液配制，加熱溶化，混合后，分裝10ml/管，冷后4℃貯存。

　　③0.15mol/L NaCl溶液。

　　④兔(或羊)抗人apoAⅠ抗血清(效價不低于1∶16)及apoB抗血清(效價不低于1∶32)。

　?、菪恃?同比濁法)。

　　⑥染色液：考馬斯亮藍R-250 0.25g溶于甲醇45ml中，加入冰醋酸10ml及水45ml，混合，溶后備用。

　?、呙撋海好可姿?0ml及甘油100ml.