2012年初級(jí)藥士微生物學(xué)輔導(dǎo):細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖
(一)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件$lesson$
細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖需要提供合適的環(huán)境條件,不同種類的細(xì)菌,生長(zhǎng)繁殖的條件不完全相同,個(gè)別種類要求特殊的環(huán)境條件。但其基本條件包括營(yíng)養(yǎng)、pH、溫度、氣體等方面。
1. 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):細(xì)菌在機(jī)體外人工培養(yǎng),必須按細(xì)菌的種類嗜性滿足其營(yíng)養(yǎng)需要。
2. 酸堿度:大多數(shù)病原菌最適的酸堿度為pH7.2~7.6,在此pH下,細(xì)菌的酶活性強(qiáng),生長(zhǎng)繁殖旺盛。個(gè)別細(xì)菌如霍亂弧菌在pH8.4~9.2的堿性條件下生長(zhǎng)最好,結(jié)核分枝桿菌在pH6.5~6.8最適宜。細(xì)菌代謝過程中分解糖類產(chǎn)生酸,pH下降,不利于細(xì)菌生長(zhǎng)。
3. 溫度:各類細(xì)菌對(duì)溫度的要求不同,大多數(shù)病原菌生長(zhǎng)最適溫度為37℃,故實(shí)驗(yàn)室中常用37℃恒溫箱培養(yǎng)細(xì)菌。個(gè)別細(xì)菌如鼠疫桿菌在28~30℃的條件下生長(zhǎng)最好。嗜熱菌能在50~60℃下生長(zhǎng),海洋細(xì)菌嗜低溫,可在0~30℃條件下生長(zhǎng)。
4. 氣體:細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖需要的氣體是氧和二氧化碳。
根據(jù)細(xì)菌對(duì)氧的需要情況,可將細(xì)菌分為三類:①專性需氧菌:具有完整的呼吸酶系統(tǒng),需要分子氧作為受氫體以完成需氧呼吸,必須在有氧的環(huán)境中才能生長(zhǎng)的細(xì)菌,如結(jié)核分枝桿菌。其中有的細(xì)菌在低氧壓(5%~6%)下生長(zhǎng)良好,高氧壓(10%)對(duì)其有抑制作用,稱微需氧菌,如空腸彎曲菌;②專性厭氧菌:缺乏完善的呼吸酶系統(tǒng),利用氧以外的其他物質(zhì)作為受氫體,只能在無氧環(huán)境中進(jìn)行發(fā)酵,有游離氧存在時(shí)不但不能利用分子氧,而且因?yàn)槿狈Ψ纸庥卸狙趸鶊F(tuán)的酶,還受其在有氧環(huán)境中產(chǎn)生的H2O2和超氧陰離子(O2―)的毒害,甚至死亡,如破傷風(fēng)芽胞梭菌;③兼性厭氧菌:兼有需氧呼吸與無氧發(fā)酵兩種功能,在有氧或無氧環(huán)境中均能生長(zhǎng),但在有氧時(shí)生長(zhǎng)較好,大多數(shù)病原菌屬此類。一般細(xì)菌在代謝過程中自身產(chǎn)生的二氧化碳即可滿足需要。某些細(xì)菌如腦膜炎奈瑟菌、淋球菌在初次分離培養(yǎng)時(shí),必須供給5%~10%的二氧化碳才能生長(zhǎng)。
(二)細(xì)菌繁殖的方式和速度
1. 細(xì)菌的繁殖方式:細(xì)菌以二分裂方式進(jìn)行無性繁殖。革蘭陽(yáng)性細(xì)菌生長(zhǎng)到一定時(shí)間,體積增大、染色體復(fù)制并與中介體相連,菌體中介體部位細(xì)胞膜內(nèi)陷形成橫隔,中介體一分為二時(shí),染色體分屬兩個(gè)子細(xì)胞,最后細(xì)胞壁內(nèi)陷,子細(xì)胞分離,完成一次分裂。革蘭陰性菌無中介體,染色體直接連接在細(xì)胞膜上,復(fù)制后附著在鄰近,當(dāng)細(xì)菌分裂完成,兩團(tuán)染色體被分隔在兩個(gè)子細(xì)胞中。通常球菌沿不同平面進(jìn)行分裂,桿菌則沿橫軸分裂。個(gè)別細(xì)菌如結(jié)核分枝桿菌通過分枝方式繁殖。
2. 細(xì)菌的繁殖速度:細(xì)菌的繁殖速度與細(xì)菌的種類及其所處的環(huán)境條件有關(guān),條件適宜時(shí),細(xì)菌繁殖快。多數(shù)細(xì)菌每20~30min分裂一次,稱為一代,有的細(xì)菌繁殖較慢,如結(jié)核分枝桿菌約18~20h才分裂一次,故結(jié)核病人標(biāo)本培養(yǎng)需要較長(zhǎng)時(shí)間。
3. 細(xì)菌的繁殖規(guī)律:細(xì)菌繁殖速度極快,如按20min繁殖一代計(jì)算,1個(gè)細(xì)菌1h后經(jīng)3次分裂成8個(gè),10h后1個(gè)細(xì)菌可達(dá)10億以上。但實(shí)際上,由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗,毒性代謝產(chǎn)物的積累,以及環(huán)境pH的改變,細(xì)菌不可能無限高速增殖,而有一定的規(guī)律。將一定量的細(xì)菌接種于定量的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),間隔不同時(shí)間取樣檢查活菌數(shù)目,以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo),活菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo),可繪出一條反映細(xì)菌增殖規(guī)律的曲線,稱為生長(zhǎng)曲線。
生長(zhǎng)曲線分為4個(gè)時(shí)期:
?、龠t緩期:為細(xì)菌進(jìn)入新環(huán)境的適應(yīng)階段,約1~4h.此期細(xì)菌體積增大,代謝活躍,但不分裂,主要是合成各種酶、輔酶和代謝產(chǎn)物,為今后的增殖準(zhǔn)備必要的條件;
②對(duì)數(shù)期:細(xì)菌培養(yǎng)至8~18h,則以幾何級(jí)數(shù)恒定快速增殖,在曲線圖上,活菌數(shù)的對(duì)數(shù)直線上升至頂峰。此期細(xì)菌的大小、形態(tài)、染色性、生理活性等都較典型,對(duì)抗生素等外界環(huán)境的作用也較為敏感,細(xì)菌的鑒定等選用此期為佳;
?、鄯€(wěn)定期:由于培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗,毒性代謝產(chǎn)物積聚,pH下降,使細(xì)菌的繁殖速度漸趨減慢,死亡數(shù)逐步上升,此時(shí),細(xì)菌繁殖數(shù)與死亡數(shù)趨于平衡。此期細(xì)菌形態(tài)和生理特性發(fā)生變異,如革蘭陽(yáng)性菌可能被染成陰性菌;同時(shí)細(xì)菌產(chǎn)生和積累代謝產(chǎn)物,如外毒素、抗生素等;芽胞也多在此期形成;
?、芩ネ銎冢杭?xì)菌繁殖速度減慢或停止,死菌數(shù)迅速超過活菌數(shù)。此期細(xì)菌形態(tài)顯著改變,菌體變長(zhǎng)、腫脹或扭曲,出現(xiàn)畸形或衰退型等多形態(tài),有的菌體自溶,難以辯認(rèn),代謝活動(dòng)停滯。芽胞也多在此期形成;④衰亡期:細(xì)菌繁殖速度減慢或停止,死菌數(shù)迅速超過活菌數(shù)。此期細(xì)菌形態(tài)顯著改變,菌體變長(zhǎng)、腫脹或扭曲,出現(xiàn)畸形或衰退型等多形態(tài),有的菌體自溶,難以辯認(rèn),代謝活動(dòng)停滯。
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